[发明专利]一种培养基及其应用与角质形成细胞的培养方法

说明书

本发明涉及细胞培养领域，尤其涉及一种培养基及其应用与角质形成细胞的培养方法。本发明将KGF、EGF、谷氨酰胺和NEAA复配添加入基础培养基，所获得的培养基能够选择性的使角质形成细胞得到增殖，能够作为角质形成细胞原代和传代培养的培养基。实验证明，采用本发明提供的酶解方法能够获得大量活力良好的单个细胞，采用本发明提供的培养基进行培养后，可获得角质形成细胞所得细胞数量大、活力高，细胞特性在传代过程中保持良好。另外，本发明采用无血清培养基作为基础培养基，在保证了细胞活力的前提下，避免了异源血清带来的风险。

技术领域

本发明涉及细胞培养领域，尤其涉及一种培养基及其应用与角质形成细胞的培养方法。

背景技术

角质形成细胞是表皮细胞的主要组成部分，是一种能合成角质蛋白的上皮细胞。在角质形成细胞向角质细胞演变过程中，一般可以分为四层，即基底层、棘层、颗粒层以及角质层。有人把前三层或前二层称为生发层或马尔匹基层。此外，在某些部位，特别在掌跖部位，角质层下方还可见到透明层。从分化机制来看，干细胞并不直接分化成终末分化细胞，而是先分化成定向祖细胞，定向祖细胞经过一定分裂次数后定向分化，进而分化成有丝分裂后细胞及终末分化细胞，实验研究获取的表皮角质形成细胞一般为定向祖细胞。

角质形成细胞的体外培养可为皮肤毒理学、烧伤治疗学、美容学和皮肤病发病机制的研究提供新的途径。但是，皮肤角质形成细胞分离培养中存在细胞易分化、易受成纤维细胞污染、不易贴壁等问题。不仅如此，角质形成细胞繁殖力较低、生活力弱，对生长条件要求较高，传代次数非常有限，培养过程中易被混杂的成纤维细胞过度繁殖而掩盖。因此，建立一种体系稳定、适合于皮肤角质形成细胞细胞生长增殖的培养方法成为了当务之急。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种培养基及其应用与角质形成细胞的培养方法，本发明提供的培养基能够作为角质形成细胞原代和传代培养的培养基，其具有选择性培养的作用，能够保证角质形成细胞在传代过程中的不被污染，增加传代次数。以本发明提供的角质形成细胞培养方法培养细胞，所得细胞数量大，活力高。

本发明提供的培养基包括基础培养基、KGF、EGF、谷氨酰胺和非必需氨基酸。

在本发明的实施例中，KGF与EGF的质量比为(8～12)：(8～12)。

在一些实施例中，KGF与EGF的质量比为10：10。

在本发明的实施例中，其中各组分的浓度为：KGF 8ng/mL～12ng/mL； EGF 8ng/mL～12ng/mL；谷氨酰胺0.5×～3×；非必需氨基酸0.5×～3×。

在本发明的实施例中，其中各组分的浓度为：KGF 9ng/mL～11ng/mL； EGF 9ng/mL～11ng/mL；谷氨酰胺0.5×～1.5×；非必需氨基酸0.5×～1.5×。

在一些实施例中，其中各组分的浓度为：KGF 10ng/mL；EGF 10ng/mL；谷氨酰胺1×；非必需氨基酸1×。

在本发明的实施例中，基础培养基为KC-FSM无血清培养基。

角质细胞生长因子(Keratinocye Growth Factor，KGF)是成纤维细胞生长因子家族的成员，能偶特异性的促进上皮细胞的增殖、迁移和分化。

表皮细胞生长因子(Epidermal growth factor，EGF)能促进上皮细胞、成纤维细胞的增值；增强表皮细胞的活力；延缓表皮细胞的老化。高活性的EGF 才能促进皮肤细胞的分裂和生长，此外它还能刺激细胞外一些大分子(如透明质酸和胶原白等)的合成与分泌。