[发明专利]胃癌的血浆miRNA生物标志物组合、其应用及胃癌早期诊断试剂盒

说明书

本发明公开了胃癌的血浆miRNA生物标志物组合及其应用，包括以下血浆miRNA：miR‑190a、miR‑331‑5p、miR‑362‑3p和miR‑369‑3p，以miR‑16作为内参。对miR‑190a、miR‑331‑5p、miR‑362‑3p和miR‑369‑3p联合检测可获得良好的胃癌诊断价值，可以实现胃肿瘤筛查、辅助胃肿瘤病理鉴定及临床诊断。以miR‑16作为内参，极大地提高了对本发明胃癌血浆miRNA生物标志物组合检测时相对定量的准确度。以本发明的生物标记物组合为靶标开发的胃癌miRNA检测试剂盒，检测快速方便、检测灵敏度、特异性高、成本低，可以满足绝大多数胃肿瘤病人的检测需求，应用范围广，经临床验证预测准确率高。

技术领域

本发明属于生物技术领域中的miRNA及其应用，特别是涉及胃癌的血浆miRNA生物标志物组合及其在胃肿瘤筛查、辅助胃肿瘤病理鉴定及临床诊断中的应用。

背景技术

胃癌是常见恶性肿瘤之一，其死亡率位居第三。最近数据表明，在我国城市男性恶性肿瘤发病率和女性恶性肿瘤死亡率排名中，胃癌均位列第二，是严重威胁人类健康和制约经济社会发展的重大公共健康问题。胃癌的早期诊断意味着可以提早干预治疗，对患者的预后意义重大。目前，用于胃癌诊断主要依赖于内镜活检，而这种方法有创，给患者带来痛苦，且对实施此项技术的医师有较高要求。胃癌的无创检查方法主要是血清肿瘤标志物，例如癌胚抗原CEA、CA199等，但是诊断的灵敏度和特异性较低。因此，寻找具有较高灵敏度和特异性的肿瘤标志物对胃癌患者的早诊早治具有重要意义。

微小RNA(microRNA，miRNA)是一类平均长度约22(19-24)个核苷酸的非编码RNA，它广泛参与了机体正常生理活动调节。miRNA可以同时调节众多靶基因，其在细胞中的异常表达将会导致肿瘤的产生。miRNA不但能在肿瘤组织中检测到，而且在众多体液中也能稳定存在，能耐受酸碱等极端环境。不仅如此，有研究指出不同肿瘤患者血浆中miRNA的种类具有特异性，这种特性为利用miRNA作为非侵入性的诊断标志物进行早期胃癌检测提供了契机。在胃癌检测中，肖斌等发明了利用组织中的miR-30b检测(或诊断)胃癌的试剂盒，利用组织中的miR-30b检测(或诊断)胃癌具有灵敏度较高(达93.33％)的优点，但是此发明没有提及miR-30b诊断胃癌的特异性如何，也即区分正常人群的能力，另一方面，该试剂盒应用上受限，这是由于受检物癌灶组织标本需要经侵入性操作取得，况且如果能取得胃癌原发灶组织，完全可以通过病理来诊断(肖斌,邹全明,朱恩东,黎伯胜,毛旭虎,李娜,郭刚.一种用于诊断或检测胃癌的试剂盒[P].重庆：CN102002532A,2011-04-06.)。进一步的，张正东等发明了利用血浆/血清中miR-148a、miR-142、miR-26a和miR-195四种miRNA中的一种或几种诊断胃癌的试剂盒(张正东,王美林,康美云,刘桑,储海燕,仝娜,吴冬梅,赵庆洪,龚伟达.检测胃癌的血清/血浆微小RNA标志物及其应用[P].江苏：CN103773761A,2014-05-07.)，在此种试剂盒中，U6基因作为内参，但已有文献报道U6基因在血浆中表达并不稳定，因而以U6基因作为内参基因计算以上四种miRNA的含量就有可能产生误差，进而影响诊断的准确性(Benz F,Roderburg C,Vargas CD,et al.U6 is unsuitable fornormalization of serum miRNA levels in patients with sepsis or liverfibrosis.ExpMol Med.2013.45:e42；Xiang M,Zeng Y,Yang R,et al.U6 is not asuitable endogenous control for the quantification of circulatingmicroRNAs.BiochemBiophys Res Commun.2014.454(1):210-4.)，另外，此发明是利用四种miRNA中的一种或几种诊断胃癌，但是，发明人并没有说明何时采用一种miRNA诊断，何时采用两种、三种或四种miRNA联合诊断，也没有说明何时采用血清诊断，何时采用血浆诊断，而且如果当用一种miRNA诊断胃癌的结果与用多种miRNA联合诊断胃癌的结果不一致时，也就是说若一种miRNA诊断结果判定为胃癌，而多种miRNA联合诊断同一受试者结果判定为非胃癌时，此时该如何判定诊断结果，此发明中均未说明，无疑会给使用者造成困扰。因此，迫切需要一种准确、特异、灵敏的利用miRNA诊断胃癌的方法及其专用引物、探针与试剂盒。