[发明专利]埃可病毒6型VP1蛋白特异性抗原表位及其融合蛋白的制备、应用

说明书

本发明埃可病毒6型VP1蛋白特异性抗原表位及其融合蛋白的制备、应用涉及基因工程技术、疫苗和诊断试剂领域。本发明是通过计算机分析埃可病毒6型表面蛋白VP1氨基酸序列，筛选出含强特异性抗原表位的蛋白片段，即第75个氨基酸至第101个氨基酸，第127个氨基酸至第141个氨基酸，第204个氨基酸至第237个氨基酸，第257个氨基酸至第289个氨基酸，这4个蛋白片段之间通过2个甘氨酸和一个丝氨酸连接，形成一个抗原表位融合蛋白。选择真核和原核生物均偏爱的密码子，化学合成该抗原表位融合蛋白的全新基因序列，利用基因工程技术，表达制备埃可病毒6型VP1蛋白抗原表位融合蛋白，用于埃可病毒抗体检测试剂的研制，及用于埃可病毒单抗和多抗制备。

技术领域

本发明埃可病毒6型VP1蛋白特异性抗原表位及其融合蛋白的制备、应用涉及的是筛选出含强抗原表位的埃可病毒6型的表面VP1蛋白片段，利用基因工程技术，制备埃可病毒6型的VP1蛋白抗原表位的融合蛋白。选择真核和原核生物均偏爱的密码子，化学合成全新的VP1蛋白抗原表位融合蛋白的基因序列，利用基因工程技术表达融合蛋白，表达的融合蛋白可用于埃可病毒疫苗及抗体检测试剂的研制等，本发明涉及基因工程技术、疫苗和诊断试剂领域。

背景技术

人肠道致细胞病变孤儿病毒（Enteric Cytopathogenichuman Orphan Virus，ECHO），简称埃可病毒，是一类单股正链RNA的肠道病毒，有34个血清型。最初对其致病性并不清楚，后来证明埃可病毒与无菌脑膜炎、婴儿腹泻、手足口病等多种疾病有关。大量研究和数据分析最终显示，本病遍布世界各地，在人群中引起广泛传播或流行，其感染可引起无菌性脑膜炎、发疹、胃肠道疾病、肝炎和肺炎等多种人类疾病，其中无菌性脑膜炎最为常见，可通过呼吸道和消化道传播。孕妇感染后可通过胎盘传播给胎儿，可引起胎儿畸形甚至死胎。埃可病毒6型（E6）是一种具有强感染性的血清型，2006-2008年，在美国肠道病毒感染中占10.7%，居第二位，自2009年起，更是跃居为第一位，这种上升趋势和严重程度使其受到越来越多的关注。

埃可病毒VP1与决定血清型的抗原决定因子密切相关，由于VP1区序列分型结果与中和试验鉴定结果具有一致性，而VP1蛋白是病毒中和的主要决定因子，其保守性有利于疫苗开发，也使其作为检测试剂提供可行性和可能性。目前对其全基因序列已经测定，为利用基因工程技术研究诊断试剂、疫苗及筛选抗病毒药物奠定了基础。

目前，对埃可病毒的检测方法主要包括平板分离培养法、酶联免疫吸附试验、分子生物学方法。但是，这些方法所需成本较高、需要特定设备、耗时且需要对样品进行复杂的处理，限制其在生活中的广泛应用。建立一种简单、快速、适合现场应用的埃可病毒的检测方法有重要意义。而研制特异的基因重组抗原是建立埃可病毒特异抗体检测试剂的发展方向。

发明内容

本发明目的是针对上述不足之处提供一种埃可病毒6型VP1蛋白特异性抗原表位及其融合蛋白的制备、应用，本发明是筛选出含强抗原表位的埃可病毒6型的表面VP1蛋白片段，利用基因工程技术，制备埃可病毒6型的表面VP1蛋白片段的融合蛋白。通过计算机分析，从埃可病毒6型表面蛋白VP1中筛选出4个含强抗原表位的蛋白片段，分别为第75个氨基酸至第101个氨基酸，第127个氨基酸至第141个氨基酸，第204个氨基酸至第237个氨基酸，第257个氨基酸至第289个氨基酸，选择原核生物偏爱的密码子，四段蛋白片段之间通过两个甘氨酸和一个丝氨酸连接，构成总长度为117个氨基酸的序列，化学合成全新的基因序列，利用基因工程技术在大肠杆菌BL21（DE3）中表达该基因。表达的蛋白可用于疫苗研制，亦可用于单克隆抗体和多克隆抗体的制备，为埃可病毒检测方法的建立奠定了基础。