[发明专利]一种杂交瘤细胞株及其分泌的抗体和制备方法、应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗甲基安非他明杂交瘤细胞株和抗甲基安非他明单克隆抗体。

还涉及抗甲基安非他明单克隆抗体作为检测甲基安非他明的应用，以及制备该抗甲基安非他明杂交瘤细胞株并分泌抗甲基安非他明单克隆抗体的方法。

背景技术

甲基安非他明(Methamphetamine,MET),化学名为N-甲基-1-苯基-丙烷-2-胺，其结构式为：

甲基安非他明(Methamphetamine),又称甲基苯丙胺，俗称“冰毒”，它属于精神类药品，是一种拟交感胺药，医疗上用于治疗注意力不足过动症(ADHD)、嗜睡症、极端的肥胖症、后脑炎、帕金森综合症等，过度服用极易导致精神病状态，表现出活动过度，情感冲动，野蛮，妄想，偏执狂，幻觉甚至有杀人倾向。此种状态过后，出现一种极度衰竭和抑郁状态，也有因严重抑郁而自杀者。长期滥用可造成慢性中毒、体重下降、消瘦、溃疡、脓肿、指甲脆化和夜间磨牙。甲基安非他明耐受性随长期使用而增加，对于未产生耐受的人，使用甲基安非他明30毫克便会引起中毒。而有报道，长期滥用者，为了达到初期使用时的欣快效应，竟将剂量增至2000毫克，这极易引起急性中毒，可造成惊阙、昏迷甚至死亡。具有极大的社会危害性。

在甲基安非他明的检测中，国内外主要采取免疫层析法、酶联免疫吸附法(ELISA)、气相色谱-质谱联用、高效液相色谱法、放射性免疫对尿液、血液、组织以及毛发等样本进行检测。尿液样本涉及到伦理与隐私，对于采样存在一定困难和样本的保真性存在一定怀疑；血液样本涉及伦理和创伤，对于供样人有一定的感染风险；组织和毛发等样本需要进行前处理，检测需要大型仪器设备，技术要求高，不适合现场快速检测。

其中唾液是唯一已成功的用来替代血液进行动力学和一些药物毒理学研究的体液，其中包括滥用药物的研究。药物的唾液浓度与血液浓度的比值(S/P比值)相对恒定，变异率小，对估计药物在体内的代谢水平具有重要的意义。甲基安非他明唾液检测机制：甲基安非他明从血液进入到唾液，原药比代谢物更具有亲脂性，更易通过脂肪膜屏障进入唾液，因此唾液的毒品检测物为毒品原体；而甲基安非他明的尿液检测机制是通过血液通过肝肾代谢，其中40％仍为原药甲基安非他明，其它通常以安非他明衍生物从尿液中排泄出来。因此唾液检测的是甲基安非他明原药，而尿液检测的是甲基安非他明以及安非他明衍生物，唾液检测更优于尿液检测。

目前国际通用的甲基安非他明诊断阈值为1000ng/ml，主要用于尿液检测。而唾液中甲基安非他明的含量较低，应用于唾液检测的抗甲基安非他明单克隆抗体要求更高的灵敏度和亲和力，本发明甲基安非他明唾液检测试剂盒利用胶体金免疫层析技术定性检测唾液中是否含有甲基安非他明，其检测阈值可达到50ng/ml，完全能够满足唾液检测的需要。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种产生抗甲基安非他明单克隆抗体的杂交瘤细胞株MET1.0，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:C2013160,已于2013年11月12号交中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏地址：湖北省武汉市武昌区武汉大学内,保藏编号：CCTCCNO:C2013160。

本发明的第二个目的是提供一种抗甲基安非他明单克隆抗体，它是由保藏编号为CCTCCNO:C2013160的抗甲基安非他明杂交瘤细胞株MET1.0分泌产生，能特异性结合甲基安非他明，分泌出的抗甲基安非他明单克隆抗体属于IgG1亚型，轻链是kappa链。

本发明的第三个目的是提供一种制备所述的由保藏编号为CCTCCNO:C2013160的抗甲基安非他明杂交瘤细胞株MET1.0分泌产生的抗甲基安非他明单克隆抗体的方法，在制备甲基安非他明人工抗原的过程中利用三氟乙酸酐保护氨基基团，使戊二酸酐能准确结合在其间位上，增强了抗原的免疫原性，有利于制备高亲和力的抗甲基安非他明单克隆抗体。

其中，甲基安非他明人工抗原是这样制备的：