[发明专利]一种采用深层液体发酵提取纳豆激酶的方法

说明书

本发明公开了一种采用深层液体发酵提取纳豆激酶的方法。该方法采用如下步骤制备纳豆激酶：菌种培养，空消，投料，实消，接菌种悬浮液，移种，放罐清洗，过滤，低温冷冻干燥，粉碎，分装，包装，储存。采用本发明的方法制备纳豆激酶，产量高，产品纯净，杂质含量低，纳豆激酶含量可大4000IU/g以上，达到了具有口服药用效果所规定的含量，也可以作为保健品长期服用该产品，该制备方法简单，流程容易控制，重复性高。

技术领域

本发明涉及一种高产纳豆激酶的提取方法，特别涉及一种采用深层液体发酵提取纳豆激酶的方法。

背景技术

纳豆菌产自纳豆，纳豆是日本人把煮熟的大豆用稻草包起来、在40℃的温度下发酵而成的一种食品。纳豆菌的发酵产物中含有纳豆激酶，是一种能够溶解血栓的酵素，并且无毒副作用，纳豆激酶是一种理想的治疗和预防血栓的潜在药物，只是，纳豆菌发酵产生的纳豆激酶产量低，酶不稳定容易失活，限制了其发展应用，但是，作为纳豆菌发酵的食品和饮料，长期使用，则有一定的预防和保健效果。

目前，采用自然发酵的纳豆产生的纳豆菌含量低，且不容易提取，只能作为一种保健食品使用。专利00107589.6公开了一种纳豆激酶的生产方法和用途；专利200610104111.2公开了纳豆激酶粉制备方法及纳豆巴西菇胶囊；专利201310154402.2公开了一种以黑豆为原料制备高活性纳豆激酶的方法；专利200810228955.7公开了一种产生纳豆激酶的枯草芽孢杆菌纳豆亚种及其应用；专利200710151453.4公开了纳豆制备工艺及含纳豆提取物的保健食品。上述专利公开的方法制备的纳豆激酶产量低，活性不高，含杂质较多，作为保健品使用可以，作为治疗血栓的口服药物使用则不够理想。

发明内容

本发明是为了克服上述现有技术中缺陷，通过采用深层液体发酵提取纳豆激酶，获得高活性纳豆激酶产品。

一种采用深层液体发酵提取纳豆激酶的方法，按照如下步骤进行：

(1)菌种培养

将保存的纳豆菌菌种进行活化，斜面培养的步骤，收集斜面培养的菌种加入到含有菌悬液的摇瓶中，镜检孢子数达到1X10⁸-1X10⁹/ml；

(2)空消

种子罐经消洗，检查后关闭所有与罐体连通的阀门，盖紧人孔，开三路蒸汽，打开蒸汽阀，排净空气，关闭排气阀，使罐压升至0.10-0.20mpa，打开所有与种子罐有关的小排气阀，排气20-40分钟，再关闭小排气阀，使罐压升至0.10-0.20mpa，然后全开排气阀，待罐压降至0时，打开人孔，排尽管内的冷凝水，关种子罐底阀门，准备进料；

(3)投料

关闭种子罐底出料阀，开启罐顶入料阀，关闭取样过滤器，冷却水进口；打开配料罐出口阀，输送泵入口，起泵，开启泵出口门上料；上料完毕停泵反吹料液管道，扫净料液管中残料；

(4)实消

按空消方式三路进蒸汽，开排气门，当罐压升至0.01-0.03mpa，调节蒸汽门，保持恒温打开所有罐顶通向外面的阀门，排气10-30分钟，关闭蒸汽，打开空气过滤器出口通入罐内，用牛皮纸包扎接种关口，关闭小排气阀，开启冷却水，使罐温降至35-37℃，关闭冷却水；

(5)接菌种悬浮液

将种子罐的压降至0，除去接种口上的盖帽，在火焰下将摇瓶种子倒入种子罐，拧紧种子罐接种口的盖帽，调整罐压至0.05-0.15mpa；

(6)移种