[发明专利]EB病毒编码的microRNA BART6-3p在制备胃癌细胞抑制剂上的应用

说明书

本发明公开了EB病毒编码的microRNA BART6‑3p在制备胃癌细胞抑制剂上的应用。microRNA BART6‑3p用于制备抑制胃癌细胞生长、增殖和预防肿瘤细胞侵袭转移的制剂；microRNA BART6‑3p的序列：CGGGGAUCGGACUAGCCUUAGA。进一步用于制备抑制胃癌细胞骨架组装和重构的制剂。本发明为胃癌的辅助治疗提供了强有力的分子生物学工具，具有深远的临床意义和重要的推广应用前景。

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及利用EB病毒编码的microRNA BART6-3p制备胃癌细胞抑制剂的方法。

背景技术

EB病毒(Epstein Barr virus,EBV)是一种普遍存在的人类疱疹病毒，可以感染全球95％左右的成人人口，除偶尔有一小部分人会引起传染性的单核细胞增多症外，大部分被感染者不会出现任何的临床症状，绝大多数情况下EBV可以在宿主体内长期潜伏感染。然而，在某些情况下潜伏感染的EBV会导致恶性肿瘤的发生，包括B细胞来源的伯基特和何杰金氏淋巴瘤，以及上皮细胞来源鼻咽癌和胃癌等。EBV导致恶性肿瘤发生的机制目前尚未完全明了，可能与EBV本身编码一系列基因的表达有关，如EBV编码的潜伏膜蛋白1(LatentMembrane Protein1，LMP1)作为一种致瘤蛋白，能激活许多宿主细胞内癌基因的表达，抑制抑瘤基因的结构和功能。

EBV作为双链DNA病毒其基因组大小约为170kb，除了可转录一系列蛋白编码基因外，最近还发现EBV也可编码一类微小RNA(microRNA，miRNA)分子。miRNA是一种长约20～25nt的调控型非编码RNA，与mRNA不同，miRNA不是DNA和蛋白质之间的“桥梁”，而是通过与目的基因靶向结合，调控基因的表达水平。EBV是第一个被发现可编码miRNA的病毒，进入宿主后EBV即开始表达产生miRNA，发挥生物学作用。目前已发现EBV可编码25个miRNAs前体，加工成44个成熟的miRNAs，且EBV编码的miRNAs在EBV基因组上成簇分布，可以分为BART和BHRF1两组。EBV编码的miRNAs可能通过调控EBV本身编码的基因或者宿主细胞内的基因，从而参与了EBV介导的肿瘤恶性转化，影响包括鼻咽癌、胃癌、淋巴瘤等在内的多种肿瘤的发生发展。然而目前对于EBV编码miRNAs的研究还不是很透彻，44个成熟的EBV miRNAs中大部分还没有功能研究的报道，比如有关EBV编码的miRNA BART6-3p的作用及机制的研究就很少。迄今为止有关BART6-3p在鼻咽癌、胃癌等实体瘤发生发展中的作用的关系及其在实体瘤病人的早期筛查、辅助诊断或者疗效预测等方面均没有文献报道。

我们通过研究表明，BART6-3p在鼻咽癌和胃癌组织中的表达均显著升高，但是非常有意思的是在鼻咽癌和胃癌组织中BART6-3p的表达水平与鼻咽癌和胃癌患者的复发转移呈负相关关系，低表达BART6-3p的患者比高表达BART6-3p的患者更容易发生复发和转移，预后更差。这表明尽管EBV是比较明确的致瘤性病毒，但并非EBV编码的基因全部都具有促进肿瘤发生发展的作用，部分基因，包括BART6-3p可能具有抑瘤功能，这也表明EBVmiRNAs的表达水平与肿瘤复发、转移预后等临床表型的关系不能推测，只能通过具体而细致的实验研究才能确定。因此，针对BART6-3p设计专用原位杂交探针及检测试剂盒，或者利用BART6-3p特异性引物进行实时荧光定量PCR等技术检测鼻咽癌和胃癌组织中BART6-3p的表达水平有望为临床上对肿瘤进行复发和转移的预测提供参考。

我们在鼻咽癌及胃癌细胞中转染人工合成的BART6-3p，证实在EBV阴性的鼻咽癌和胃癌细胞中表达BART6-3p可以明显抑制肿瘤细胞的生长增殖以及侵袭转移能力。因此，BART6-3p又可以用于制备抑制肿瘤细胞生长、增殖和预防肿瘤细胞侵袭转移的制剂。