[发明专利]一种利用植物源活性物质拮抗多药耐药志贺氏菌的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种石韦中提取的能拮抗多药耐药志贺氏菌的物质。

背景技术

志贺氏菌属（ShigellaCastellani）属于革兰氏阴性杆菌，是引起人类细菌性痢疾的最常见的致病菌。由于抗生素的滥用，志贺氏菌属产生了广谱的耐药性。自20世纪50年代，日本学者首次报道志贺菌对磺胺类药物耐药以来，相继又出现了志贺菌对氯霉素、四环素和氨苄西林耐药的志贺菌株。近来，甚至又出现了对喹诺酮类、复方新诺明乃至超广谱β-内酰胺类药物耐药的志贺菌株。2015年《华盛顿邮报》报道称，一种耐药性的索氏志贺氏菌引起了美国马萨诸塞州、加利福尼亚和宾夕法尼亚州数次疾病暴发。这些地区的疾病控制和预防中心发现，这三个州90%的实验病例都对抗生素环丙沙星具有耐药性。耐药志贺菌已引起全球广泛关注，除了对四环素、氨苄西林、磺胺类药物耐药之外，对喹诺酮类尤其是环丙沙星的耐药逐年增加，产β-内酰胺酶的耐药志贺菌对头孢菌素的敏感性下降；在免疫低下的人群，耐药志贺菌对阿奇霉素的敏感性下降。志贺氏菌的耐药性已成为一大难题，筛选新的药物刻不容缓。

有柄石韦（PolypodiumpetiolosumChrist）为水龙骨科(Polypodiaceae)石韦属(Pyrrosia)植物。具有利尿、通淋、清湿热之功效。临床上用于热淋、血淋、石淋、小便不通，主治肺炎水肿、膀胱炎、泌尿系结石、尿血、崩漏、肺热喘咳。目前，石韦的利水通淋作用已得到大量运用，但对其抗病毒、抗菌作用有待进一步开发研究。从目前我国对石韦的研究来看，主要限于理论研究水平，缺少对石韦的开发利用。且目前抗生素多已产生了对应的耐药菌，而植物源的抗菌物质则因为使用较少，鲜有相对的耐受菌。所以，植物源的抗菌物质也是近年来的研究热点。

发明内容

本发明的目的是制备一种能拮抗多药耐药志贺氏菌的药物。

本发明所提供的拮抗多药耐药志贺氏菌的物质是从有柄石韦中提取出来的。本实验中用到的志贺氏菌可耐受红霉素，庆大霉素，青霉素，四环素，克林霉素，新霉素等15种抗生素。本发明人先分别用水，醇，乙酸乙酯三种溶剂浸提有柄石韦叶片，分别测定其抑菌效果，发现石韦酯提物效果最好，能有效拮抗多药耐药志贺氏菌的生长。石韦酯提物的制备方法如下：首先对有柄石韦叶片进行预处理，弃去有虫蛀叶片，阴干至叶面含水量小于5％，粉碎。称取10kg粉碎后的石韦叶片，置于玻璃容器中，加入乙酸乙酯100L，浸提48h，每隔2-4h缓慢振荡容器，对浸提液进行减压抽滤，另加100L乙酸乙酯于滤渣中，合并两次滤液。滤液通过旋转蒸发仪35-55℃浓缩至10L(含量为1g/mL)，滤液经微孔膜(0.22μm)过滤除菌备用。然后用QP2010气相色谱-质谱联用仪对有柄石韦酯提物进行成分分析，并进行单乙酸甘油酯的成分分析。根据GC-MS的结果显示，石韦乙酸乙酯提取液中可检测到28个峰(图1)，主要成分见表1。对检测到的成分进行分析，发现其主要为6类化合物，含量较多的物质为酯类、糖苷类物质，其中单乙酸甘油酯在酯提物中占有较大比例，根据文献分析推测单乙酸甘油酯在石韦酯提物中对于拮抗多药耐药志贺氏菌有重要作用。遂用单乙酸甘油酯进行试验分析，发现其能有效拮抗多药耐药志贺氏菌的生长。最后用MIC和MBC确定其最佳浓度，可以将之作为一种植物源的抗多药耐药志贺氏菌的物质。

表1石韦酯提物GC-MS鉴定物质分类

附图说明

图1是石韦酯提物GC-MS分析色谱图

图2是单乙酸甘油酯试剂GC-MS分析图

图3是石韦乙酸乙酯酯提物GC-MS分析图

图4是单乙酸甘油酯质谱图

图5是单乙酸甘油酯试剂检测质谱图

图6是石韦酯提物检测质谱图

图7是观察石韦酯提物对志贺氏菌菌体形态影响的扫描电镜图

图7a空白对照组；图7b乙酸乙酯处理组；图7c石韦酯提物处理组。

具体实施方式

实施例子石韦酯提物拮抗多药耐药志贺氏菌

1、石韦酯提物的制备

（1）对有柄石韦叶片进行预处理，弃去有虫蛀叶片，阴干至叶面含水量小于5％，粉碎。称量100g石韦粉末，将石韦粉末装在具塞容器中；然后加入1L乙酸乙酯，密封。浸提48h，浸提过程中，每隔2-4h缓慢振荡烧杯，让浸取物充分溶解在乙酸乙酯中；