[发明专利]一种用于竹节参分子鉴定的引物及序列特异扩增区域（SCAR）的方法

权利要求书

1.一种用于竹节参分子鉴定的引物，其特征在于，所述的引物为Z1，其序列为：F5’-AGACGTCCACATGGGCTA-3’；R5’-TAGACGTCCACGTTAAGTTAG-3’。

2.采用权利要求1所述的特异性引物Z1进行竹节参序列特异性扩增区域(SCAR)标记分子的鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：

基因组DNA的提取：用液氮将研钵、大小杵，药匙预冷，称取200mg叶片和10％PVP(W/W)置于液氮中，迅速研磨成细粉；将研磨好的细粉转移至1.5mL离心管中，迅速加入4℃预冷的700μL去多糖buffer，混匀，在冰上静置30min，4℃3000r·min^-1离心5min，弃上清，此步骤重复一次，弃上清，加入700μL65℃预热的2×CTAB提取液，65℃水浴40min，每隔10min轻轻上下颠倒混匀一次，取出1.5mL离心管，冷却至室温，12000r·min^-1离心10min；取上清，加入等体积的氯仿：异戊醇的混合液，混匀10min，12000r·min^-1离心10min，取上清，重复此步骤一次，取上清至新的1.5mL离心管，加入0.6倍体积的-20℃预冷的异丙醇，混匀，于-20℃静置1h，4℃12000r·min^-1离心10min，沉淀用70％乙醇洗涤2次，无水乙醇洗涤1次，用吹风机冷风吹干液体，干燥后，加入30μL灭菌ddH₂O和0.5μLRNaseA，37℃水浴1h，于-20℃保存备；

SCAR分析：应用特异性SCAR引物Z1对竹节参及其它人参属植物基因组DNA进行PCR扩增，其中，特异性SCAR引物Z1序列为：F5’-AGACGTCCACATGGGCTA-3’；R5’-TAGACGTCCACGTTAAGTTAG-3’；SCAR-PCR反应体系为：模板DNA1μL，2×TaqPCRMastermix12.5μL，上下游引物各1μL，加灭菌ddH2O补齐至25μL，其中，上下游引物浓度均为10mmol/L；SCAR-PCR扩增程序为94℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，循环34次；72℃补充延伸5min，取PCR反应产物20μL，在100V电压下，经1.5％琼脂糖凝胶(含GelRed)电泳30min，GeneGenius凝胶分析系统检测照相，即可完成竹节参的序列特异性扩增区域(SCAR)标记分子的鉴定。

3.权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，SCAR-PCR反应体系为：模板DNA1μL，2×TaqPCRMastermix12.5μL，上下游引物各1μL，加灭菌ddH₂O补齐至25μL，其中，上下游引物浓度均为10mmol/L。

4.权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，SCAR-PCR扩增程序为94℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，循环34次；72℃补充延伸5min。