[发明专利]一种用于检测眼病的试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于检测眼病的试剂盒及其检测方法。

背景技术

甲状腺相关眼病(thyroidassociatedophthalmopathy,TAO)是内分泌科常见疾病之一，也是目前世界上治疗最为困难的疾病之一。TAO病程较长，各年龄段均可发生，以女性多发。轻者可影响生活、工作质量，损伤外貌，重者可导致视力下降，甚至失明，给患者带来了沉重的经济及心理负担。近年来，由于生活方式的改变，工作压力的增加，社会环境状况的变化，食用加碘盐的普及，以及不正规用药等因素，TAO的发病率明显上升，住院率高。目前由于本病原因未明，临床主要以激素、免疫抑制剂、生长激素类似物、抗甲状腺药物、眶内放射、眼眶减压术等综合治疗为主，但由于种种原因，效果并不尽人意，迄今为止尚无任何一种药物能有效治疗TAO，并获长期缓解。因此，研究治疗甲状腺相关眼病的药物是亟待解决的技术问题。而检测所述疾病更是本领域积极研究的方向。

近年来的研究表明，细胞间粘附分子-1的表达与自身免疫甲状腺病免疫病理过程密切相关。甲状腺炎患者的甲状腺组织内浸润淋巴细胞、内皮细胞的sICAM-1和sICAM-1表达异常活跃。另外，发现伴有突眼的患者血清sICAM-1水平异常增高，这是因为患者眼球后组织强烈表达sICAM-1，所以血清sICAM-1升高的水平多与眶周炎症浸润程度密切相关。此外，研究还发现，在药物的治疗过程中，甲状腺功能和临床症状的好转与血清sICAM-1水平的下降并不同步，往往甲状腺功能的恢复在很大程度上要早于sICAM-1的恢复。综上所述，可溶性细胞间粘附分子-1的浓度变化可能对于判断GD的自身免疫紊乱水平、停药与否和是否复发等具有重要意义。细胞间粘附分子-1的表达与甲状腺相关眼病有直接关联，因此，检测细胞间粘附分子-1的表达情况，可以直接用于鉴定甲状腺相关眼病。然而传统的检测细胞间粘附分子-1的表达情况具有操作复杂，费时的缺点。

核酸适体（Aptamer,又称适配体,适配子）是能高亲和性、高特异性的结合某种生物革El标的单链寡核酸分子（ssDNA或ssRNA)。核酸适体是通过指数富集配体系统进化技术(Systemat1cEvolut1onofL1gandsbyExponent1alenr1chment,SELEX)从人工合成的DNA/RNA文库中筛选得到的能够高度特异性结合靶标分子的单链DNA/RNA。已报道核酸适体的靶标包括金属离子、有机小分子、多肽、蛋白质、细胞甚至组织等。核酸适体的分子识别功能与抗体类似，具有与抗体分子相当甚至更强的靶标识别能力，但与抗体相比具有很多优良的特性，如分子量小，能批量生产，不易失活，无免疫原性、容易合成与标记、快速的穿透组织、良好的代谢动力学、不同批次之间产品不会存在差异和具有很好化学稳定性，在生物检测、疾病诊断治疗等领域具有重要的应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种特异结合sICAM-1的核酸适体及其试剂盒。

本发明提供的核酸适体，是序列表的序列1-15所示的单链DNA。

所述核酸适体与sICAM-1蛋白具有较好的亲和能力。

还可将所述核酸适体进行修饰或改造，得到所述核酸适体的衍生物。

所述核酸适体的衍生物可为如下任意一种：

a)将所述核酸适体删除部分或增加部分互补的核苷酸，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；

b)将所述核酸适体进行核苷酸取代或部分修饰，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；

c)将所述核酸适体的骨架改造为硫代磷酸酯骨架，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；

d)将核酸适体改造为肽核酸，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；

e)将所述核酸适体连接上荧光、放射性和治疗性物质后，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物。

所述核酸适体可用于制备检测sICAM-1的试剂盒。

利用本发明的核酸适体，可以捕获血液中的sICAM-1，从而用于甲状腺相关眼病筛查。利用本发明的核酸适体，部分代替单克隆抗体捕获sICAM-1进行检测，具有高灵敏、成本低、易制备、易保存的优点。本发明具有很高的应用价值。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

实施例1、核酸适体的筛选和制备

设计两端包含大约20个核苷酸、中间包括39个核苷酸的随机核酸文库如下：