[发明专利]肠道病毒实时荧光定量检测试剂盒

权利要求书

1.一种肠道病毒实时荧光定量检测试剂盒，用于区分EV71型肠道病毒和CA16型肠道病毒，其特征在于，包括：

用于扩增EV71型肠道病毒的上游引物EV71F1，用于扩增EV71型肠道病毒的下游引物EV71R1，用于检测EV71型肠道病毒的探针EV71P1，所述探针EV71P1的两端分别结合有第一荧光基团和第一荧光猝灭剂；

用于扩增CA16型肠道病毒的上游引物CA16F2，用于扩增CA16型肠道病毒的下游引物CA16R2，用于检测CA16型肠道病毒的探针CA16P2，所述探针CA16P2的两端分别结合有第二荧光基团和第二荧光猝灭剂，所述第一荧光基团与所述第二荧光基团不同；以及

实时荧光定量PCR反应缓冲液。

2.根据权利要求1所述的肠道病毒实时荧光定量检测试剂盒，其特征在于，所述上游引物EV71F1的序列为SEQIDNo.1所示的序列，所述下游引物EV71R1的序列为SEQIDNo.2所示的序列，所述探针EV71P1的序列为SEQIDNo.3所示的序列。

3.根据权利要求1或2所述的肠道病毒实时荧光定量检测试剂盒，其特征在于，所述探针EV71P1的5’端结合有第一荧光基团，所述探针EV71P1的3’端结合有第一荧光猝灭剂，所述第一荧光基团为ROX，所述第一荧光猝灭剂为BHQ1。

4.根据权利要求1所述的肠道病毒实时荧光定量检测试剂盒，其特征在于，所述上游引物CA16F2的序列为SEQIDNo.4所示的序列，所述下游引物CA16R2的序列为SEQIDNo.5所示的序列，所述探针CA16P2的序列为SEQIDNo.6所示的序列。

5.根据权利要求1或4所述的肠道病毒实时荧光定量检测试剂盒，其特征在于，所述探针CA16P2的5’端结合有第二荧光基团，所述探针CA16P2的3’端结合有第二荧光猝灭剂，所述第二荧光基团为JOE，所述第二荧光猝灭剂为BHQ1。

6.根据权利要求1所述的肠道病毒实时荧光定量检测试剂盒，其特征在于，还包括用于扩增非竞争性内标的内标上游引物F3、用于扩增非竞争性内标的内标下游引物R3以及用于检测非竞争性内标的内标探针P3，所述内标探针P3的两端分别结合有第三荧光基团和第三荧光猝灭剂，所述第三荧光基团与所述第一荧光基团不同并且所述第三荧光基团与所述第二荧光基团不同。

7.根据权利要求6所述的肠道病毒实时荧光定量检测试剂盒，其特征在于，所述内标上游引物F3的序列为SEQIDNo.7所示的序列，所述内标下游引物R3的序列为SEQIDNo.8所示的序列，所述内标探针P3的序列为SEQIDNo.9所示的序列。

8.根据权利要求6或7所述的肠道病毒实时荧光定量检测试剂盒，其特征在于，所述内标探针P3的5’端结合有第三荧光基团，所述内标探针P3的3’端结合有第三荧光猝灭剂，所述第三荧光基团为FAM，所述第三荧光猝灭剂为BHQ1。

9.根据权利要求1所述的肠道病毒实时荧光定量检测试剂盒，其特征在于，还包括工作标准品、阳性对照品和阴性对照品。

10.根据权利要求9所述的肠道病毒实时荧光定量检测试剂盒，其特征在于，所述工作标准品为核酸浓度为1×10³～1×10⁶拷贝的线性梯度模板，所述阳性对照品为EV71型肠道病毒灭活病毒株的RNA提取物，所述阴性对照品为无菌去离子水。