[发明专利]引起对抗黄病毒的免疫应答的抗原及其应用方法

说明书

本申请是以下申请的分案申请：申请日：2009年11月17日；申请号：200980145447.5；发明名称：同上。

技术领域

本发明涉及引起对抗黄病毒的免疫应答的抗原及其应用方法。

背景技术

日本脑炎病毒(JEV)血清复合组(serocomplex-group)由包含西尼罗河病毒(WNV)和JEV的蚊传播黄病毒组成，这两种病毒均可引起人类的严重脑炎。自从1999年WNV进入美国以来，其迅速传遍美国，其在西半球的地理分布预计将进一步扩大，而JEV是东南亚、中国和印度的病毒脑炎的最常见原因。目前，尽管在努力开发针对这两种病毒的疫苗，但对二者还没有FDA批准的特定治疗。

黄病毒西尼罗河病毒(WNV)和日本脑炎病毒(JEV)是引起人类大部分病毒性脑炎的原因。WNV感染广泛的禽类和包括人在内的哺乳动物物种。已显示，WNV可通过输血、器官移植和哺乳来传播。西尼罗河脑炎(WNV)病毒覆盖了包括南欧、非洲、中亚以及最近的北美的广大地理区域。该病毒在以色列、埃及、印度和巴基斯坦通常造成脑膜脑炎的症状。在埃及，该病毒是所有脑膜炎和无菌性脑炎中3％的原因。JEV是亚洲的病毒性脑炎的最重要的单种原因，病死率平均为30％。JEV是东南亚、印度和中国的主要问题，该病毒是这些地区的地方病。近年来，JEV已传播到其他地理区域，例如澳大利亚和巴基斯坦，并且因此造成这些地区的重要新兴病毒感染。

日本脑炎(JE)是包括大脑、小脑和脊髓在内的中枢神经系统的炎症。已显示，利用来源于小鼠脑的灭活疫苗进行针对JEV的接种非常有效并减少了疾病负担。然而，对该疫苗的免疫原性和安全性还有担忧。我们由原代仓鼠肾(PHK)细胞产生的活减毒的基于细胞培养的JEV疫苗在中国已经获得批准，该疫苗显示安全有效。然而，由于PHK不是经证实可产生人疫苗的细胞系，许多国家不使用这种JEV疫苗。

JEV感染被看作是脑炎的最严重病毒性原因之一，死亡率达到30-50％，并且幸存者中有高百分比的神经后遗症[8]。因此，地区和国内公共卫生机构(包括WHO)通常推荐病区的居民进行针对日本脑炎的大规模免疫程序。在发达的非病区国家，JE被看作是罕见的外来疾病。但近几十年来，来自非病区的游客和其他旅行者中的感染病例报告几乎每年都有报道。然而，有危险的国际旅游者人群中疫苗覆盖率非常低，这不仅是因为部分旅行者及其旅行健康顾问缺乏对该病的认识，还因为惧怕与目前批准的小鼠脑来源的JEV疫苗JE-VAXR相关的潜在有害反应[33]。

JE-VAXR是由小鼠脑产生的福尔马林灭活的疫苗，在日本批准用于儿童，在美国和一些欧洲国家批准用于旅行者和军人。对多剂量方案的需要和与反应原性相关的问题使其应用复杂化。在发展中国家，需要无需频繁加强即可引起持续免疫的可负担的疫苗来控制JE。小鼠脑来源的JEV疫苗几十年来已广泛用于亚洲各国和一些发达国家。在澳大利亚、欧洲和北美接受免疫的成人中，已报道了严重的副反应，所述副反应由风疹或血管性水肿构成，在某些情况中还有呼吸困难。这些副反应的出现率不一，为每10000次注射中小于1至104次，其中过敏反应是所涉及的主要原因之一。

黄病毒的E蛋白最具有免疫原性，适于疫苗开发。蛋白E由3个结构域(DI、DII和DIII)组成，其中DIII主要含有亚复合体和类型特异性表位。数种基于DIII的疫苗在某些情况下已显示出具有免疫原性和有效性。

DIII蛋白在若干WNV和JEV株之间高度保守。WNV的DIII与JEV的DIII的整体氨基酸同一性和相似性的值分别大约为81％和94％。DIII充当受体结合域，形成可独立折叠的连续多肽部分。当然，DIII内的突变已显示出影响黄病毒的毒力和趋向性。rDIII是较稳定的蛋白，因此可成为具有吸引力的抗原。由于天然DIII也不被糖基化，因此在原核细胞中细菌表达过程中蛋白糖基化的缺乏很可能不影响其抗原性。在受各毒力病毒侵染的小鼠中，JEV和登革热病毒的重组DIII已显示了免疫原性和保护性，表明DIII基疫苗制剂抗黄病毒的适合性。然而，在前期尝试中，可以清楚看到需要相对高浓度的rDIII来诱导中和抗体应答，表明rDIII免疫原性较差。

最近对来自亚洲的JEV株的分子分析将该株分为4个不同基因型群[37]。由于现有的JEV疫苗只是基于JE的一个株，因此这种高度的序列多样性带来了对抗循环株JEV的JEV疫苗的交叉保护效果的问题和担心[12,13]。