[发明专利]一种具有生物活性的创面修复细胞膜片、制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学材料技术及创伤修复领域，尤其涉及具有生物活性的创面修复细胞膜片及其制备方法和应用。

背景技术

皮肤创伤是临床高发疾病，可以分为急性创伤或者慢性创伤。人体对于创面有一定的自我修复能力，但是当创面面积过大或者创面局部环境紊乱例如血管被破坏，血供不足时，创面便无法正常修复，甚至造成长期难以愈合、反复发作的创口。

生物活性玻璃是一种硅基无机材料，在组织修复领域获得了很多应用。生物活性玻璃被证明可以促进体内外血管化，临床上也出现了基于生物活性玻璃粉末的创面修复产品。但是由于它粉末的性质，很难固定在创面位置。而且，生物玻璃产生局部碱性的化学环境，会造成病人的不适。

与此同时，已有广泛的文献报道了组织工程中运用人自身的细胞来修复人体组织的研究进展，利用细胞来进行组织修复已经取得了一些成果，这是利用外加细胞自身参与到修复过程中，利用其生长因子和蛋白等来进行组织的修复，但是其修复能力有限。

发明内容

有鉴于现有技术的上述缺陷，发明人致力于开发既利用人体自身细胞，又利用生物活性玻璃促进创面修复的皮肤创伤敷料。本发明提供了一种具有生物活性的创面修复细胞膜片及其制备方法，以促进皮肤创面的修复。

一方面，本发明提供了一种具有生物活性的创面修复细胞膜片，该创面修复细胞膜片包括经生物活性玻璃浸提液培养的成纤维细胞及其细胞外基质；成纤维细胞培养于NuncHydroCellUpCell培养皿，创面修复细胞膜片由与NuncHydroCellUpCell培养皿配套使用的聚合物膜制得。NuncHydroCellUpCell(Nunc,ThermoScientific)是一种热敏性细胞培养皿，当温度在细胞培养温度37℃时，培养皿的表面是疏水性的，细胞会正常贴壁，而当温度低于32℃时，培养皿的表面变为亲水性的，细胞可从培养皿壁上脱落。

生物活性玻璃是含有CaO，P₂O₅，SiO₂和Na₂O的无机氧化物，其浸提液含有钙离子、磷离子和硅离子。

另一方面，本发明提供了一种制备具有生物活性的创面修复细胞膜片的方法，包括以下步骤：

步骤一、将生物活性玻璃粉体浸泡于无血清的成纤维细胞培养液，培养1天后无菌过滤收集，得到生物活性玻璃浸提液，该生物活性玻璃浸提液用成纤维细胞培养液稀释后待用；

步骤二、在NuncHydroCellUpCell培养皿中加入成纤维细胞的细胞悬浮液，用步骤一中制得的含有生物活性玻璃浸提液的成纤维细胞培养液进行细胞培养；

步骤三、移除NuncHydroCellUpCell培养皿中的培养液，加入预热的成纤维细胞培养液以避免细胞变干，在成纤维细胞上覆盖与所述NuncHydroCellUpCell培养皿配套使用的聚合物膜，室温下静置10至15分钟后，将聚合物膜揭起，制得具有生物活性的创面修复细胞膜片。

优选地，步骤一中，将1g生物活性玻璃粉体浸泡于5mL无血清的成纤维细胞培养液中，培养1天后无菌过滤收集，得到生物活性玻璃浸提液，该生物活性玻璃浸提液用成纤维细胞培养液稀释后待用。

优选地，生物活性玻璃浸提液与成纤维细胞培养液的稀释比例为1/32至1/256，更优选地为1/128。

优选地，步骤二中，成纤维细胞的细胞悬浮液含有2x10⁵至3x10⁵个成纤维细胞。

优选地，步骤二中，细胞培养的时间为3至7天。

优选地，步骤三中，预热的成纤维细胞培养液的体积为40μL至60μL，优选为50μL。

再一方面，本发明公开了一种具有生物活性的创面修复细胞膜片在创面修复中的应用。

经生物活性玻璃浸提液培养的成纤维细胞膜片具有明显的生物活性，能表达更多的细胞生长因子例如血管内皮生长因子(VEGF)，碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)，表皮生长因子(EGF)以及细胞外基质中的胶原蛋白(CollagenI)以及纤维粘连蛋白(Fibronectin)。经生物活性玻璃浸提液培养的成纤维细胞及其细胞外基质能够促进动物全切创面处胶原蛋白沉积和血管再生，并且能促进创面收缩，明显地提高创面修复速度。由于生物活性玻璃细胞膜片具有促进血管生成的作用，其对慢性创伤的修复尤其具有良好的修复效果。

以下将结合附图对本发明的构思、具体结构及产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本发明的目的、特征和效果。