[发明专利]经IL-12/CD62L融合蛋白改造的肿瘤治疗剂及其制法和用途

说明书

本发明提供高效低毒的肿瘤治疗剂及其制法和用途。具体地，本发明提供了一种IL‑12/CD62L融合蛋白。在本发明中，通过利用含IL‑12/CD62L融合基因的慢病毒修饰抗肿瘤T细胞，通过CD62L肿瘤抗原依赖性的激活所诱导的特异性切割及释放，从而实现肿瘤抗原激活的细胞膜表面IL‑12的释放。实验表明，在本发明中，可在T细胞攻击肿瘤的局部实现定点和定时释放IL‑12，从而改变T细胞‑肿瘤组织的免疫微环境，进而实现抗肿瘤免疫效果的最大化，并显著降低毒副作用。

技术领域

本发明涉及医药领域，具体地涉及一种经IL-12/CD62L融合蛋白改造的肿瘤治疗剂及其制法和用途。本发明提供了一类IL-12/CD62L基因修饰的、具有增强抗瘤效果的T细胞。

背景技术

IL-12是一种非常重要的免疫刺激因子。IL-12是由共价键链接的异质性二聚体细胞因子，由p35和p40亚基组成，在体内由激活的免疫细胞分泌。IL-12是重要的细胞免疫调控因子，在抗感染免疫及恶性肿瘤的免疫中通过NK细胞以及CTL发挥作用。

先天性缺失IL-12或对IL-12不反映的个体，其抗感染免疫存在严重缺陷。一系列的临床前实验模型证实，IL-12的介入可以显著地延长荷瘤动物模型的生存期。

虽然IL-12具有显著的抑瘤效果，但是由于其系统性全身给药会引起全身性毒副反应，因而受到极大的限制。在本发明之前，IL-12的临床应用由于其所诱导的全身性毒副作用，以及早期临床试验通过全身系统性给药引起的两例患者的意外死亡，使其临床应用受到大大的限制。

为了避免全身性给药的毒副作用从而实现临床应用的目的，临床科研工作者们通过肿瘤局部注射、瞬时表达及多点注射等途径应用于肿瘤的临床试验，但是由于IL-12的治疗效果同回输的IL-12的剂量直接相关，上述局部的临床方案并未有取得显著的抑瘤效果。

为了解决这一问题，本发明人曾经试图通过基因修饰抗肿瘤T细胞持续分泌IL-12来实现抗肿瘤效果的最大化，但是由于未知的原因(一种可能的原因是IL-12的毒副作用)通过持续分泌IL-12方案基因修饰的T细胞在体外不能有效扩增，并引起大量的T细胞凋亡。

为了解决这一问题，本发明人亦通过TCR活化特异性调控IL-12的表达的基因修饰方案，取得了T细胞体外有效扩增的难题，也取得了一定的抑瘤效果，但同时存在IL-12脱离调控所引发的毒副作用，无法有效应用于临床应用。

综上所述，本领域尚缺乏高效且毒副作用不明显的基于IL-12的抗肿瘤药物。因此，本领域迫切需要开发高效且毒副作用低的肿瘤治疗药物。

发明内容

本发明目的就是提供了一种高效且毒副作用低的肿瘤治疗药物及其制法和应用。

在本发明的第一方面，提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白包括融合在一起的以下元件：

(i)任选的位于N端的信号肽和/或前导肽；

(ii)第一蛋白元件；

(iii)第二蛋白元件；以及

(iv)任选的位于第一蛋白元件和第二蛋白元件之间的连接肽元件；

其中，所述信号肽可操作地连于由(ii)、(iii)和(iv)所构成的融合元件；

并且第一蛋白元件为IL-12蛋白元件；第二蛋白元件为CD62L的蛋白元件。

在另一优选例中，所述的“可操作地连于”指所述信号肽可引导所述融合元件的表达或跨膜转移(定位)。

在另一优选例中，所述的融合蛋白具有选自下组的结构：

(1)式Ia所述结构：

D-A-B (Ia)，或