[发明专利]磷酸肌酸二钠盐中杂质化合物的高效液相色谱检测方法

权利要求书

1.一种磷酸肌酸二钠盐中杂质化合物的高效液相色谱检测方法，其特征在于：所述杂质化合物具有如下式(Ia)所示的结构：

对杂质化合物Ia进行检测的条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相中以乙腈或甲醇为有机相、以缓冲盐及离子对试剂的水溶液为水相，检测器为紫外检测器。

2.根据权利要求1所述的磷酸肌酸二钠盐中杂质化合物的高效液相色谱检测方法，其特征在于：所述检测方法以Ia、Ib、Ic或Id为对照品，Ib、Ic、Id具有式(Ⅰ)所示的结构通式：

其中，对于Ib，M1为Na，M2为H；对于Ic，M1为K，M2为K；对于Id，M1为K，M2为H；

Ia、Ib、Ic和Id的制备方法如下：

(1)Ia的制备

富集副产物的磷酸肌酸二钠盐粗品，加甲醇超声处理两次，倾去上层，沉淀加水使溶解，再加入甲醇或乙醇，搅拌均匀，过滤，滤液于0～10℃放置结晶，再用水-甲醇或水-乙醇重结晶一次，滤出，干燥，即可得化合物Ia纯品，纯度大于98％；

(2)Ib的制备

取化合物Ia加水溶解，用1MHCl调PH至3～4，加入乙醇搅，抽滤，即得化合物Ib；

(3)Ic的制备

将由肌酐和三氯氧磷缩合反应得到的肌酐磷酰氯，边搅拌边缓慢加入到质量浓度为20％的KOH溶液中，搅拌过夜，用盐酸调PH至7～8，搅拌下加入溶液体积4倍量的乙醇，静置数小时后，抽滤，得到磷酸肌酸钾粗品，富集副产物后，加甲醇超声处理两次，倾去上层，沉淀加水使溶解，再加入甲醇或乙醇，搅拌均匀，过滤，滤液于0～10℃放置结晶，再用水-甲醇或水-乙醇重结晶一次，滤出，干燥，即得到化合物Ic纯品；

(4)Id的制备

取化合物Ic加水溶解，用1MHCl调PH至3～4，加入乙醇搅拌，抽滤，即得化合物Id。

3.根据权利要求2所述的磷酸肌酸二钠盐中杂质化合物的高效液相色谱检测方法，其特征在于：取Ia、Ib、Ic或Id纯品，溶解于流动相中，分别制成50μg/ml的对照液1和5μg/ml的对照液2；取待测样品溶解于流动相中，配制成5mg/ml的待测液；待测液为磷酸肌酸钠粗品时使用对照液1，分别吸取等量的对照液1和待测液注入液相色谱仪，测定磷酸肌酸钠粗品中Ia的含量；待测液为磷酸肌酸钠精制品时使用对照液2，分别吸取等量的对照液2和待测液注入液相色谱仪，测定磷酸肌酸钠精制品中Ia的含量。

4.根据权利要求1所述的磷酸肌酸二钠盐中杂质化合物的高效液相色谱检测方法，其特征在于：有机相与水相的体积比为0-40:60-100。

5.根据权利要求4所述的磷酸肌酸二钠盐中杂质化合物的高效液相色谱检测方法，其特征在于：有机相与水相的体积比为20:80。

6.根据权利要求1所述的磷酸肌酸二钠盐中杂质化合物的高效液相色谱检测方法，其特征在于：有机相为乙腈。

7.根据权利要求1所述的磷酸肌酸二钠盐中杂质化合物的高效液相色谱检测方法，其特征在于：水相中缓冲盐为磷酸二氢钠或磷酸二氢钾，离子对试剂为四丁基氢氧化铵或四丁基溴化铵或十二烷基三甲基氯化铵，pH为4-8。

8.根据权利要求7所述的磷酸肌酸二钠盐中杂质化合物的高效液相色谱检测方法，其特征在于：水相中缓冲盐含量为0.2wt％，离子对试剂含量为0.1wt％，pH为6.3-6.8。

9.根据权利要求1-8任一项所述的磷酸肌酸二钠盐中杂质化合物的高效液相色谱检测方法，其特征在于：紫外检测波长为210nm。