[发明专利]一种生物敷料的制备方法及生物敷料

说明书

本发明涉及组织工程技术领域，尤其涉及一种生物敷料的制备方法及生物敷料。该方法工艺简单，所获得的生物敷料含有活性因子，在应用于创面修复时，活性因子能够迁移至创面参与创面修复，缩短愈合时间，减轻患者痛苦。本发明实施例提供一种生物敷料的制备方法，包括：步骤1)将人成纤维细胞接种到覆盖有胶原的尼龙网膜上，培养，获得真皮层；步骤2)将所获得的真皮层进行冷冻干燥，获得含有失活的人成纤维细胞和细胞外基质的真皮层；步骤3)在含有失活的人成纤维细胞和细胞外基质的真皮层的上表面涂覆硅胶溶液，静置、凝固，获得生物敷料。

技术领域

本发明涉及组织工程技术领域，尤其涉及一种生物敷料的制备方法及生物敷料。

背景技术

近年来，随着组织工程皮肤的发展，越来越多的真皮替代物被研发出来，并被作为一种临时性敷料应用于临床上来覆盖皮肤缺损，加快创面修复。

目前，在这些临时性敷料中，Integra是通过将牛I型胶原与6-硫酸软骨素交联，构成海绵状网格作为真皮层，在所述真皮层的一表面上外覆一层硅胶膜而获得的一种临时性敷料，其中，所述6-硫酸软骨素是共价连接在蛋白质上形成蛋白聚糖的一类糖胺聚糖，6-硫酸软骨素被广泛应用于动物组织的细胞外基质及细胞表面，用于改善炎症等，该临时性敷料利用外来营养物质交联用于覆盖创面，从而为创面修复提供外来营养物质，仅能够作为临时敷料来覆盖皮肤缺损，随着组织工程皮肤的不断发展，含有活细胞的真皮层作为一种生物敷料用于创面修复时，由于活细胞分泌的细胞外基质具有活性因子，能够参与创面修复，缩短愈合时间，因此，寻求一种具有活性因子的生物敷料成为目前的紧要任务。

发明内容

本发明的主要目的在于，提供一种生物敷料的制备方法及生物敷料。该方法工艺简单，所获得的生物敷料含有活性因子，在应用于创面修复时，活性因子能够迁移至创面参与创面修复，从而能够加快创面修复，缩短愈合时间，减轻患者痛苦。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一方面，本发明实施例提供一种生物敷料的制备方法，包括：

步骤1)将人成纤维细胞接种到覆盖有胶原的尼龙网膜上，培养，获得真皮层；

步骤2)将所获得的真皮层进行冷冻干燥，获得含有失活的人成纤维细胞和细胞外基质的真皮层；

步骤3)在含有失活的人成纤维细胞和细胞外基质的真皮层的上表面涂覆硅胶溶液，静置、凝固，获得生物敷料。

优选的，所述将所获得的真皮层进行冷冻干燥包括：

预冻结段：将真皮层在-30--40℃冻结1.5-3h，真皮层中的水分冻结为冰；

升华阶段：在真空度为10-30Pa下，在1h内升温至-10℃，保温8-10h；在1h内升温至0℃，保温8-10h，在1min内升温至10℃，保温2-3h，将预冻结段形成的冰升华除去真皮层中大部分水分；

再干燥阶段：在真空度为10-30Pa下，在1min内升温至20℃，保温3-5h，除去真皮层中的结合水分。

可选的，步骤1)之前还包括：制备覆盖有胶原的尼龙网膜；

具体为：取尼龙网膜除菌，将除菌后的尼龙网膜沾上胶原溶液置于容器中，静置、凝固。

优选的，所述容器为皮片发生器。

可选的，将人成纤维细胞接种到覆盖有胶原的尼龙网膜上具体为：将人成纤维细胞与胶原溶液的混合液加入到覆盖有胶原的尼龙网膜上，其中，所述混合液中人成纤维细胞的浓度为1-10×10⁶个/ml。

优选的，步骤1)中培养的具体方法为：在36-38℃、5％-10％的二氧化碳培养箱中培养8-12天，每天更换培养液一次。