[发明专利]一种C反应蛋白定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片

说明书

技术领域

本发明涉及临床医学体外诊断领域，具体涉及一种C反应蛋白定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片，能够在短时间内实现对生物样品中C反应蛋白的定量检测，具有操作简单，灵敏度高，成本低等特点。

技术背景

C反应蛋白(C-reactionprotein，CRP)常在急性炎症病人血清中出现，由于细胞合成，是全身性炎症反应的非特异性指标。CRP在感染时含量明显升高，在急性炎症反应过程中，CRP是机体最敏感的蛋白质之一，并且是机体炎症反应精确的客观指标。CRP是冠心病的独立危险因子之一，在冠心病的预后中具有重要价值；在急性心肌缺血和心肌梗死中，CRP含量快速升高。正常健康人的CRP值很低，90％的正常人CRP＜1.0mg/L，在炎症或急性组织损伤后，CRP的合成在4-6小时内迅速增加，36-50小时达到高峰，峰值为正常值的100-1000倍，经过积极合理治疗，3-7天可迅速降低至正常值。

传统CRP的检测是基于免疫透射比浊法和免疫散射比浊法，检测范围为3-5mg/L，这些方法灵敏度不高，难以用于新生儿感染疾病和心血管疾病等方面的预测和诊断。近年来，出现了多种检测CRP的新方法，如免疫荧光法和时间分辨免疫荧光法，最低检测限0.0005-0.1mg/L，极大提高了检测的灵敏度，这些方法所测定的CRP我们称之为超敏CRP(hs-CRP)。中国专利(CN101769932)通过采用不同粒径的苯乙烯胶乳提供了全量程CRP检测试剂盒，既可以检测低浓度的CRP又可以检测高浓度的CRP，该方法不会因HOOK效应影响检测的准确性，但是操作复杂，检测时间长。因此，建立一种检测时间短，并且检测除了能在实验室进行外，还要求能够床旁进行，同时适用于低值CRP的检测方法，具有重要的意义。

近年来，生物分析技术领域得到了快速的发展，出现了很多重要的研究方向。微流控芯片分析技术是其中最活跃的一支，在科研和实际应用领域都获得了广泛的重视。微流控芯片作为一种新型的分析检测平台，具有高通量、集成化、便携式、易操作、低成本等优点，已经在众多领域中得到了广泛的应用，尤其是在免疫分析领域已崭露头角。

表面功能化的磁性微球作为固相载体，可以用来有效地捕获核酸、蛋白分子、病毒颗粒甚至细胞，已经被广泛地应用于各种生化指标的临床诊断领域。而微流控芯片系统具有快速、高效、集成化等特点，两者相结合，将成为一种新型的高性能检测方法，以解决当前检测方法中存在的灵敏度低，检测过程复杂，难以实现微量样本检测的问题，有望进一步推动临床检测仪器向便携化和微型化发展。

免疫磁珠的生物微流控芯片是将磁颗粒技术，免疫分析集成到微流控芯片上的一种分析检测方法，目前这种综合性的检测方法的主要难点表现为：1)液体在芯片内部微流动的智能控制，目前常采用的方法是在芯片内部设置多个微泵和微阀，使得微流控体系变得更加复杂化；2)反应体系的混合不充分，导致反应不充分；3)集成化程度不高，导致非特异性背景高。

发明内容

针对上述问题，本发明提出一种C反应蛋白定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片，采用简单的方法即可实现微流控芯片内部微流体的智能控制，同时能够使反应液体得以充分混合，保证反应体系高效进行，可快速实现样品中CRP浓度的定量检测。检测灵敏度高，结果准确可靠，重复性好。

本发明的技术问题所采用的技术方案如下：

一种C反应蛋白定量检测的磁微粒化学发光微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片结构主要包括盖片(1)和底片(11)；其中盖片(1)上的加样口(2)，样本液流通道(6)，第一生物标记物存储池(4)，微混合器(7)，过渡区(10)依次连接；底片(11)上的过滤器(12)，反应池(13)，清洗池(14)，检测池(15)，溶液释放通道(18)依次连接，底片(11)上检测池(15)通过溶液释放通道(18)与清洗液存储池(16)和发光液存储池(17)连接；

所述反应池(13)中包被磁颗粒标记的抗C反应蛋白抗体；所述第一生物标记物存储池(4)、清洗液存储池(16)和发光液存储池(17)中存储预封装试剂；所述盖片(1)和底片(11)用胶带(20和22)密封组装。

具体地，所述微流控芯片的第一生物标记物存储池(4)、清洗液存储池(16)和发光液存储池(17)的体积为10～500μL，为液囊或腔体。

具体地，所述微流控芯片的微混合器(7)是宽度为20～300μm，深度为10～100μm的蛇形，折线形或方波形结构。优选蛇形或方波形结构，进一步优选方波形结构。