[发明专利]一种胶体金层析法检测人体尿液HIV1/2抗体试纸及其制备方法

权利要求书

1.一种胶体金层析法检测人体尿液HIV1/2抗体的试纸，包括样品垫、金包被的聚酯膜、包被的硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘贴在底板上，其特征在于：

所述的结合垫包被有特异性抗原(HIV-1gp36)和特异性抗原(HIV-1gp41)，

所述的硝酸纤维素包被膜上有检测线(T)和质控线(C)，

其中的检测线包被有“IgG-蛋白L-金”结合型抗原蛋白，其中的质控线(C)包被有抗体(c)。

2.根据权利要求1所述的一种胶体金层析法检测人体尿液HIV1/2抗体的试纸，其特征在于：检测时样本中的IgG同蛋白L-胶体金粒子结合在一起，形成“IgG-蛋白L-金”结合物，“IgG-蛋白L-金”结合物沿着试纸条向上方移动，首先到达包被了HIV抗原的检测区。如果样本中含有HIV的抗体，“IgG-蛋白L-金”结合物将同抗原结合，并在检测线上滞留下来，形成一条淡红色的线，这表示阳性结果。检测区里如果没有带颜色的线条表示样本中不含HIV抗体，游离的“IgG-蛋白L-金”结合物继续向试纸上方移动，到达试纸的对照区。“IgG-蛋白L-金”结合物将同羊抗人IgG多抗结合在一起而富集在对照线上，形成一条淡红色的线。对照线的出现证明试纸条检测功能正常。无论样本中是否含有HIV-1/2抗体，在有效试验中，试纸条的对照区都应当出现淡红至紫色的对照线。

3.根据权利要求1所述的一种胶体金层析法检测人体尿液HIV1/2抗体的试纸，其特征在于：包被的硝酸纤维素膜上有检测线和对照线，检测线包被HIV1/2抗原，对照线包被羊抗人IgG多抗。

4.根据权利要求1所述的一种胶体金层析法检测人体尿液HIV1/2抗体的试纸，其特征在于：所述的样品垫是经过样品垫封闭液浸制处理的玻璃纤维素膜，所述的样品垫处理液为含有鸡血清、BSA的PBS溶液，并含有过氧化氢脲(UHP)氧化杂质和吐温80、和904表面活性剂。

5.根据权利要求1所述的一种胶体金层析法检测人体尿液HIV1/2抗体的试纸，其特征在于：包被的HIV1/2抗原的特异性抗原HIV-1gp41，HIV-1gp41为纯化的基因工程重组抗原。

6.根据权利要求1所述的一种胶体金层析法检测人体尿液HIV1/2抗体的试纸，其特征在于：包被使用的硝酸纤维素膜为毛细流动速度较慢的180膜，这样可以增加样本中抗体与包被膜上抗原的反应时间。

7.一种胶体金层析法检测人体尿液HIV1/2抗体的试纸条的制备方法，该试制如前述的权项1-6所述，该试制由样品垫、金包被的聚酯膜、包被的硝酸纤维素膜、吸水垫面共同组成，其特征在于该方法包括：

步骤1，抗原的制备：选用纯化的基因工程表达的HIV1/2病毒重组抗原，

以及包被的硝酸纤维素膜的制备：用包被基础液稀释抗原至浓度分别为1.76mg/ml和0.2mg/ml，喷在硝酸纤维素膜上干燥18～20小时，密封装在有干燥剂的铝箔袋内贴板用，

以及金包被的聚酯膜垫的制备：用金结合物悬浮液复溶，将金结合物吸收值调整到30～34，继续检测三次吸收值。用0.22ul的微孔滤膜过滤，贴标签2～8℃保存待用，

以及胶体金结合物的包被的制备：精确量取胶体金结合物，加入蔗糖使之含量为20％和海藻糖使之含量为5％，轻轻倒置混匀，包被开始前加入10％UHP(15ul/ml)轻轻倒置混匀。以0.7ul/mm的包被量，使用轴对轴Accuflow包被机包被。50℃条件下，2h±15min干燥后密封到含干燥剂的铝箔袋中，储存在干燥罐中，

以及样品垫的制备，是经处理液浸渍处理的玻璃纤维膜，于37℃烘干后备用；

步骤2，在地板上顺次相互搭接粘贴经前述步骤1所制作完成的样品垫、金包被的聚酯膜、包被的硝酸纤维素膜、吸水垫面；

步骤3，对步骤2所制作完成的材料，切割成试纸条。