[发明专利]检测烟草冷杉醇合成关键基因NtCPS2单核苷酸突变的特异引物及检测方法

权利要求书

1.一种检测烟草冷杉醇合成关键基因NtCPS2单核苷酸突变的检测方法，包括以下步骤：

S1，根据烟草冷杉醇合成关键基因NtCPS2的第四号外显子cDNA序列，基于AS-PCR原理，在SNP突变处设计两个上游引物，使引物的3′末端核苷酸与SNP位点一致，同时在引物3′末端倒数第三位人工引入错配碱基T，在第四号外显子末端设计一个公用的下游引物，这样构成的两对引物形成互补引物，能够相互检测SNP的类型，同时也能够检测后代为杂合体或纯合体；

两个上游引物CPS2-1F和CPS2-2F以及公用下游引物CPS2-R：

上游引物CPS2-1F 5′-3′：ACAGATGAAAGGTTTGATAG

上游引物CPS2-2F 5′-3′：ACAGATGAAAGGTTTGATAT

下游引物CPS2-R 5′-3′：TCTCTTATGAAGGCACGTGT；

NtCPS2的第四号外显子序列：

S2，提取被检测烟草品种的DNA；

S3，以被检测烟草品种的DNA为模板，使用NtCPS2基因特异性引物对被检测烟草品种的DNA进行PCR扩增；

S4，采用电泳检测PCR扩增产物，判断PCR扩增产物是否含有292bp的特征条带：

如果引物对CPS2-1F/CPS2-R有条带，而引物对CPS2-2F/CPS2-R无条带，则被检测烟草品种为正常纯合型G，有冷杉醇合成；

反之，则被检测烟草品种为突变纯合型T，不合成冷杉醇；

如果这两对引物都有扩增条带，则说明检测品种为杂合型。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，PCR扩增的反应体系组成为：2×Dreamtaq MIX 10uL，模板DNA 1ul，上游引物1uL，下游引物1uL，最后用双蒸水将反应体系补至20uL。