[发明专利]包含蛋白酶变体的组合物和方法

权利要求书

1.亲本蛋白酶的一种分离的蛋白酶变体，所述变体包含具有三个选自 X024G/R、X053G、X078N、X101N、X128A/S和X217L/Q的氨基 酸置换的氨基酸序列，其中所述变体具有蛋白水解活性并且所述变 体的每个氨基酸位置通过与SEQIDNO:2的氨基酸序列中的氨基酸 位置的对应关系进行编号，所述对应关系通过所述变体的氨基酸序 列与SEQIDNO:2比对来确定。

2.亲本蛋白酶的一种分离的蛋白酶变体，所述蛋白酶变体具有蛋白水 解活性并且包含在选自位置24、53、78、97、101、128和217的一 个或多个与SEQIDNO:2的氨基酸位置对应的氨基酸位置处具有变 更的氨基酸序列，其中所述至少一个变更独立地是

(i)在占据所述位置的氨基酸残基的上游或下游插入一个或多个氨 基酸残基，

(ii)占据所述位置的氨基酸残基缺失，或者

(iii)占据所述位置的氨基酸残基置换为另一不同的氨基酸残基，

其中每个氨基酸位置通过与SEQIDNO:2中所示的解淀粉芽孢 杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列中的氨基酸位置的对应关系 进行编号，所述对应关系通过所述变体的氨基酸序列与SEQID NO:2的比对确定。

3.亲本蛋白酶的一种分离的蛋白酶变体，其中(a)所述蛋白酶变体包含(i) 与SEQ:2的序列具有至少90％同一性以及(ii)在位置24和53处具有 甘氨酸置换、在位置78和101处具有天冬酰胺置换、在位置128处 具有丙氨酸或丝氨酸置换以及在位置217处具有谷氨酰胺置换的氨 基酸序列；(b)所述亲本蛋白酶与SEQIDNO:2具有至少90％序列同 一性；(c)所述变体的每个氨基酸位置通过与SEQIDNO:2的序列的 氨基酸位置的对应关系进行编号；以及(d)所述蛋白酶变体相对于所 述亲本蛋白酶具有增加的蛋白水解活性和/或清洁活性。

4.一种具有蛋白酶活性的分离的多肽，所述多肽包含与选自如下的多 肽序列具有至少85％序列同一性的氨基酸序列：

a)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128A+Y217Q+A088T+N109G+ A116T+G131H+N243V+L257G；

b)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128A+Y217Q+S033T+N076D；

c)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128S+Y217Q+S009T+N109G+ K141R+N243V；

d)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128A+Y217Q+S162G+K256R；

e)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128A+Y217Q+N109G+A116T ；

f)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128A+Y217Q+N109G+L257G ；

g)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128A+Y217Q+S162G+L257G；

h)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128A+Y217Q+N061G+N109G+ N243V；

i)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128S+Y217Q+N109G+N243V+ S248A；

j)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128S+Y217Q+S033T+N076D+ N109G+N218S+N243V+S248N+K256R；

k)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128A+Y217Q+N109G+A116T+ N243V+K256R；

l)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128A+Y217Q+A088T+N109G+ A116T+G131H+N243V；

m)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128A+Y217Q+A088T+N109G ；

n)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128A+Y217Q+N109G+N243V ；

o)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128A+Y217Q+T158S+L257G；

p)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128A+Y217Q+N061S+N109G+ N243V；

q)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128S+Y217Q+P040A+N109G+ N243V+S248N+K256R；

r)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128S+Y217Q+S009T+S018T+Y 021N+N109G+K141R；

s)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128A+Y217Q+A088T+N109G+ A116T+T158S+N243V+K256R；

t)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128A+Y217Q+A088T+N109G+ A116T+T158S+N218S+L257G；

u)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128A+Y217Q+N109G+K256R ；

v)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128S+Y217Q+N109G+N243V+ K256R；

w)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128A+Y217Q+S063G+K256R；

x)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128A+Y217Q+S063G+N109G ；

y)BPN'-S024G+S053G+S078N+S101N+G128S+Y217Q+S063G；

z)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128A+Y217Q+S063G+N076D ；

aa)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128S+Y217Q+S033T+N076D+ N218S；

bb)BPN'- S024G+S053G+S078N+S101N+G128A+Y217Q+N076D+N218S ；以及

cc)BPN'-S024G+S053G+S078N+S101N+G128A+Y217Q，其中所述 变体的每个氨基酸位置通过与SEQIDNO:2的序列的氨基酸位 置的对应关系进行编号。