[发明专利]一种适于PK-15细胞生长的低血清无蛋白培养基及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于细胞培养领域，具体涉及一种适于PK-15细胞生长的低血清无蛋白培养基及其制备方法。

背景技术

PK-15系猪肾细胞(PigKidney)，体外培养呈上皮样贴壁细胞，该细胞对多种病毒比较敏感，如猪圆环病毒(PCV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)等，可应用于猪圆环病毒疫苗、猪瘟病毒疫苗、猪细小病毒疫苗等的制备。

猪圆环病毒(Porcinecircovirus，PCV)在分类上属圆环病毒科、圆环病毒属。PCV不凝集牛、羊、猪、鸡等多种动物和人的红细胞，其抗血清不能抑制猪细小病毒(PPV)对红细胞的凝集性。在临床上主要表现为断奶后仔猪多系统衰弱综合症(PostweaningMultisystemicWastingSyndrome，PMWS)和猪皮炎与肾炎综合征(PDNS)。除PMWS外，PDNS(猪皮炎与肾病综合征)、PNP(增生性坏死性肺炎)、PRDC(猪呼吸道疾病综合征)、繁殖障碍、先天性颤抖、肠炎等相关的猪病，死亡率10％～30％不等，较严重的猪场在暴发本病时死淘率高达40％，给养猪业造成严重的经济损失。众所周知，疫苗免疫是防控猪圆环病毒病的主要手段。

猪瘟(classicalswinefever,CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种高度接触性热性传染病，具有很强的传染性，不同年龄、性别和品种的猪均能感染，而且高致死率，它的传播必然会对社会经济造成巨大的损失，1984年世界动物卫生组织(OIE)将其列入A类传染病，目前我国也将其定为一类传染病。猪瘟除可引起败血症以外，还会引起一系列其它临床表现，如妊娠母猪流产、胎儿畸变、慢性营养性消耗、淋巴细胞和血小板减少等。目前，世界大部分国家都采取了严格的卫生防疫措施、剔除猪瘟感染猪、净化猪群来控制和消灭猪瘟。一些发达国家通过防疫和防控手段已经根除了猪瘟，但我国尚未彻底消灭，所以接种猪瘟疫苗尤其重要，也是控制猪瘟传播的重要手段之一。

目前对于PK-15细胞的传统培养方式是贴壁培养，通常在生长及维持培养基中需要加入10％-20％的动物血清，以提供细胞生长所需的营养成分及细胞保持正常形态的支持蛋白。该传统工艺效率低、生产成本高；不同血清批次间差异显著；放大重现性较差；对下游纯化工艺要求高；容易出现血清出复杂成分导致的疫苗质量隐患，涉及生物安全和公共卫生问题。另外，目前全球血清供应趋紧，这大大影响了疫苗企业的生产效率。因此尽量少用血清已成为PK-15细胞培养的发展趋势，同时低血清与无血清细胞培养技术的研究与应用已被列入十二五国家科技支撑计划重点项目。

现有技术常通过添加牛血清白蛋白、转铁蛋白、胰岛素、重组表皮生长因子等动物源成分以及大豆水解蛋白等植物源蛋白成份，从而来降低血清的使用量。但是上述蛋白质对生物制品(如疫苗)的安全性有很大影响。

发明内容

本发明主要提供了一种适于PK-15细胞生长的低血清无蛋白培养基及其制备方法，具有无蛋白、无动物源成份、化学成份明确几大优点，在科研上可减少血清对实验过程和结果的干扰，使用本发明所述的培养基，使PK-15细胞的培养过程中是在2％低血清浓度条件下进行，减少了血清的用量。其技术方案如下：一种适于PK-15细胞生长的低血清无蛋白培养基，其包括以下组分：

氨基酸部分包括以下组分：

维生素部分包括以下组分：

无机盐部分包括以下组分：

微量元素部分包括以下组分：

还包括以下其他组分：

优选的，一种适于PK-15细胞生长的低血清无蛋白培养基的组分如下：氨基酸部分包括以下组分：

维生素部分包括以下组分：

无机盐部分包括以下组分：

微量元素部分包括以下组分：

还包括以下其他组分：

一种适于PK-15细胞生长的低血清无蛋白培养基的制备方法，包括如下步骤：

(1)取干燥后的各组分分别装入球磨罐内，球磨1.5-3小时，得培养基干粉；