[发明专利]一种体外获得造血干/祖细胞的方法在审
| 申请号： | 201510664655.3 | 申请日： | 2015-10-14 |
| 公开（公告）号： | CN105238758A | 公开（公告）日： | 2016-01-13 |
| 发明（设计）人： | 王金勇;李学家 | 申请（专利权）人： | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 主分类号： | C12N5/0789 | 分类号： | C12N5/0789 |
| 代理公司： | 北京力量专利代理事务所(特殊普通合伙) 11504 | 代理人： | 宋林清 |
| 地址： | 510530 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 体外 获得 造血 细胞 方法 | ||
1.一种体外获得人造血干/祖细胞的方法，包含以下步骤：
步骤1：将无饲养层培养传代40-70代的人多能干细胞用EDTA消化法制备hES克隆，种植到matrigel包被过的细胞培养板上，补加mTeSR培养24小时；
步骤2：换用添加了ITS的stemlineⅡ的基础培养基进行培养，并在不同时期添加不同的细胞因子；添加细胞因子BMP4和ActivinA培养4天后，换用细胞因子VEGF和SCF培养2天；换用造血干/祖细胞维持及扩增相关的细胞因子培养8天，获得人造血干/祖细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1所述hES克隆为含几十到几百个hES细胞的克隆团块。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，BMP4浓度为10-30ng/ml，ActivinA浓度为8-12ng/ml。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，BMP4浓度为20ng/ml，ActivinA浓度为10ng/ml。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，VEGF的浓度为30-50ng/ml，SCF浓度为40-60ng/ml。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，VEGF的浓度为40ng/ml，SCF浓度为50ng/ml。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述使用造血干/祖细胞维持及扩增相关的细胞因子为SCF、Flt-3L、TPO、IL-3、IL-6与UM171的组合。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞因子浓度为SCF40-60ng/ml，FLT-3L40-60ng/ml，TPO8-12ng/ml，IL-340-60ng/ml，IL-640-60ng/ml，UM17140-50ng/ml。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞因子浓度为SCF50ng/ml，FLT-3L50ng/ml，TPO10ng/ml，IL-350ng/ml，IL-650ng/ml，UM17145ng/ml。
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