[发明专利]一种荧光免疫层析检测试纸及制备方法

权利要求书

1.一种荧光免疫层析检测试纸，包括样品垫(1)，抗体承载膜(2)，吸水纸(3)，依次通过带有粘合剂的底板(4)互相搭接而成，所述抗体承载膜(2)上从靠近样品垫(1)一端分别依次包被标记物的混合物结合线(5)、检测线(6)和质控线(7)，其特征在于，所述标记物的混合物结合线(5)是将荧光微球分别与抗体1和生物素偶联标记物的混合物用划膜喷金仪包被在抗体承载膜预处理过的预处理区域(8)内。

2.权利要求1所述荧光免疫层析检测试纸，其特征在于，所述抗体承载膜预处理为在靠近样品垫(1)的一端用划膜喷金仪包被上宽度1.8-2.2mm的预处理液；优选的，为在靠近样品垫(1)一端且距边缘4mm的抗体承载膜(2)膜上用划膜喷金仪包被；所述预处理液为PH7.4的0.01MPBS加入20质量体积％蔗糖，2质量体积％BSA和0.02质量体积％NaN₃。

3.权利要求1所述荧光免疫层析检测试纸，其特征在于，所述标记物的混合物结合线(5)位于抗体承载膜预处理过的预处理区域(8)的居中位置。

4.权利要求1所述荧光免疫层析检测试纸，其特征在于，所述检测线(6)包被被检测项目的抗体2或抗原。

5.权利要求1所述荧光免疫层析检测试纸，其特征在于，所述标记物的混合物结合线预处理区域(8)的宽度大于标记物的混合物结合线(5)宽度；优选地，预处理区域(8)的宽度是标记物的混合物结合线(5)宽度的2倍。

6.权利要求1所述荧光免疫层析检测试纸，其特征在于，所述荧光微球是采用稀土元素铕或荧光素包裹在二氧化硅颗粒或者乳胶颗粒上；优选地，所述荧光微球为采用稀土元素铕或荧光素包裹在二氧化硅颗粒。

7.权利要求1所述荧光免疫层析检测试纸，其特征在于，所述标记物的混合物结合线(5)位于靠近样本垫(1)一端且距边缘4mm的抗体承载膜(2)膜上，标记物的混合物结合线(5)与检测线(6)相隔10mm，标记物的混合物结合线(5)距离质控线(7)15mm。

8.一种权利要求1所述荧光免疫层析检测试纸的制备方法，其特征在于，步骤为，

预处理液制备：取PH为7.4的0.01MPBS溶液加入20质量体积％蔗糖，加入2质量体积比％BSA和0.02质量体积％NaN₃，充分混匀后；

标记物的混合物的制备：选用荧光微球的氨基和葡聚糖的醛基偶联后，按质量比1:1加入抗体1混合，葡聚糖上其他醛基可与抗体1上的氨基偶联，形成荧光微球与抗体1偶联标记物的混合物；优选的，选用荧光微球和抗体1按质量比1:1混合，形成荧光微球与抗体1偶联标记物的混合物；以同样方法，用荧光微球的氨基和葡聚糖的醛基偶联后，按质量比1:1加入生物素混合，葡聚糖上其他醛基可与生物素上的氨基偶联，形成荧光微球和生物素偶联的标记物；将所述两种标记物按体积比1:1混合，并用含1质量比％BSA的pH7.4，0.01MPBS500倍稀释混合物；

T线包被液的配制：用pH7.4，0.01MPBS稀释液将鼠抗检测项目的单克隆抗体稀释至工作浓度；

C线包被液的配制：用pH7.4，0.01MPBS稀释液将亲和素稀释至工作浓度；

抗体承载膜(2)的预处理：选用硝酸纤维膜作为抗体承载膜，在靠近将要贴玻璃纤维膜的一端用划膜喷金仪包被上宽度约2mm的上述制备好的预处理液，该宽度约2mm的区域称为预处理区域；45℃2h烘干；

包被线：将上述预处理后的硝酸纤维膜通过划膜喷金仪将荧光微球分别与抗体1和生物素偶联标记物的混合物荧光、T线包被液、C线包被液同时包被上去，形成标记物的混合物结合线、T线、C线，所述3条线，线宽均为1mm；标记物的混合物结合线(5)与检测线(6)距离约10mm，标记物的混合物结合线(5)与质控线(7)距离约15mm；之后将该包被后的NC膜于45℃2h烘干；所述标记物的混合物结合线(5)位于预处理区域的居中位置；

组装成检测卡：将玻璃纤维膜和烘干包被后的硝酸纤维膜、吸水纸依次粘贴组装，组装完成后用切条机切成每条宽度为4mm的试条，装进试条卡，压卡，制备成检测卡即可。

9.一种权利要求1所述荧光免疫层析检测试纸用于抗原或抗体检测的用途。

10.权利要求9所述荧光免疫层析检测试纸用于抗原或抗体检测的用途，其特征在于，加样品于权利要求1所述荧光免疫层析检测试纸的样品垫上，样品中的待检物层析到结合线，待检物与所述荧光免疫层析检测试纸的结合线上的抗体1标记物特异性反应后形成复合物，层析至T线，形成双抗夹心或竞争，结合线上的生物素标记物层析至C线与亲和素形成特异性反应，利用荧光定量检测系统检测T线和C线区域的富集的荧光强度，将T/C荧光强度值处理后带入标准曲线即得出样品中待测物的含量；

优选的，所述标准曲线得到的方法为，用pH7.4，0.01MPBS稀释国家或国际标准品到所需的线性浓度，用荧光免疫层析检测试纸测试各浓度相应的荧光强度值，标准品浓度和荧光强度值比值拟合得到相关趋势线。