[发明专利]一种纯色万代兰组织培养繁育方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种纯色万代兰组织培养繁育方法。

背景技术

纯色万代兰(VandasubconcolorT.TangetF.T.Wang)为兰科万代兰属附生草本植物，属于热带附生兰，具有较强的抗旱能力，容易栽培，叶片和根都很有特色，叶片呈棒状，生长在直立的茎两旁，花序从叶腋中长出，四季都可以开花；若光照充足，一年可以开2-3次花；花期长，花色艳丽繁多，花姿奔放，是世界级的花卉名品，富有极高的观赏价值。纯色万代兰的种子细小，本身无法储存养分，自然条件下，其种子萌发阶段完全依靠菌根真菌为其提供养分，自然繁殖率低，种子种苗稀缺，资源更新非常困难。

发明内容

本发明的目的是提供一种纯色万代兰组织培养繁育方法，能够快速有效地提高纯色万代兰种苗的繁殖速度和质量，实现纯色万代兰优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。

本发明通过以下技术方案达到上述目的：一种纯色万代兰组织培养繁育方法，包括以下步骤：

(1)外植体的选择与消毒：取纯色万代兰健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，剥去外层包叶后，依次用2v/v％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1v/v％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；

(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的外植体剥去0.2-0.3mm的茎尖分生组织，接种到MS培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加了1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1mg/L的吲哚乙酸INAA、2.0mg/LPVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；

(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养60天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加了0.2-0.6mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2-0.6mg/L的激动素KT、2.0-4.0mg/L萘乙酸NAA、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。

本发明的突出优点在于：

(1)采用生物技术对纯色万代兰进行组织培养快速繁殖，能够在短时间内培育出大量适合栽培种植的纯色万代兰幼苗，保障纯色万代兰种苗的增殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。

(2)采用本发明所述的培养方法得到的纯色万代兰丛生芽增殖系数达到8-10倍，丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。

实施例1

本发明所述的纯色万代兰组织培养繁育方法的一个实例，包括以下步骤：

(1)外植体的选择与消毒：取纯色万代兰健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，剥去外层包叶后，依次用2v/v％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1v/v％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；

(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的外植体置于解剖镜下，剥去0.2-0.3mm的茎尖分生组织，接种到MS培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加了1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1mg/L的吲哚乙酸INAA、2.0mg/LPVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；

(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养60天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加了0.2mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.6mg/L的激动素KT、3.0mg/L萘乙酸NAA、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，丛生芽增殖系数为8.0。

实施例2