[发明专利]一种蒙古芯芭组织培养繁育方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种蒙古芯芭组织培养繁育方法。

背景技术

蒙古芯芭CymbariamongolicaMaxim，为玄参科芯芭属植物，其蒙药名为“阿拉坦-阿给”，是蒙医专用药芯芭的基源植物之一，多生于海拔620-110米之间的荒漠草原及山地草原上，主要分布于内蒙古、黑龙江、河北等地。全草入药，具有燥“协日乌素”，清热，祛风湿、利尿、止血等功效，用于治疗风湿关节炎、吐血、衄血、便血、外伤出血、肾炎水肿、黄水疮等症。

目前，市场上的芯芭药材主要来自野生资源，随着其药用价值的提高，市场对药材的需求量增大，导致芯芭被过渡采挖，野生资源蕴藏量也日趋减少，资源濒临枯竭。虽然近年来国内外对蒙药的关注不断增加，芯芭也引起了诸多学者的重视，研究报道不断增加，但主要集中在资源分布、定性鉴别、化学成分及药理作用研究上。到目前为止，针对芯芭的人工种植、种苗繁育技术的相关研究未见报道。蒙古芯芭一般通过种子进行繁殖，但在初步的种苗繁育工作中发现，蒙古芯芭的种子繁殖存在发芽率低、发芽不整齐、种苗质量不稳定等问题，严重制约了蒙古芯芭的规范化种植和生产。

发明内容

本发明的目的是提供一种蒙古芯芭组织培养繁育方法，能够有效快速地提高蒙古芯芭种苗的繁殖速度和质量，实现蒙古芯芭优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。

本发明通过以下技术方案达到上述目的：一种蒙古芯芭组织培养繁育方法，该方法包括以下步骤：

(1)外植体的选择与消毒：取蒙古芯芭饱满果实，剥去果皮后取出种子作为外植体，将外植体依次用2v/v％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加入2-3滴吐温-20的100毫升0.1v/v％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到无菌外植体，其中，无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；

(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的无菌外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养45天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；

(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养75天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加0.5-2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1-0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。

本发明的突出优点在于：

(1)采用生物技术对蒙古芯芭进行组织培养快速繁殖，通过蒙古芯芭丛生芽的繁殖，在短时间内可培育出大量适合栽培种植的蒙古芯芭幼苗，保障蒙古芯芭种苗的增殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。

(2)采用本发明所述的培养方法得到的蒙古芯芭丛生芽增殖系数达到15-20倍，丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。

实施例1

本发明所述的蒙古芯芭的组织培养快速繁殖方法的一个实例，包括以下步骤：

(1)外植体的选择与消毒：取蒙古芯芭饱满果实，剥去果皮后取出种子作为外植体，将外植体依次用2v/v％洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1v/v％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到无菌外植体；

(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的无菌外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养45天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；