[发明专利]一种甲磺酸苦柯胺B有关物质检测方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种甲磺酸苦柯胺B有关物质质量控制方法。

背景技术

苦柯胺B(KukoamineB)，化学结构下所示：

天然产物苦柯胺B(KukoamineB)是ShinjiFunayama等首次从地骨皮中分离提取的生物碱类化合物。苦柯胺B能有效拮抗导致脓毒症的细菌病原体相关分子—内毒素/脂多糖(endotoxin/lipopolysaccharide,LPS)和细菌DNA(CpGDNA)，对治疗脓毒症表现出良好活性，且作用明显优于阳性对照药物，因而具有良好的成药前景。

苦柯胺B在制备和放置过程中容易因为酸、碱、氧化等条件的改变而使得其有关物质增高。

在研究过程中，我们分离纯化了如下三种苦柯胺B的杂质：

杂质1：

杂质2：

杂质3：

目前没有对苦柯胺B杂质的研究，也没有关于苦柯胺B杂质质量控制方法的详细研究报道。为了更好的研究苦柯胺B的药物性质，提高苦柯胺B的药物质量。实验人员对苦柯胺B的有关物质的质量控制方法进行了研究。找到了一种精密度高，操作简单，适用性强,可以用于苦柯胺B及相关制剂中上述三种杂质的质量控制。

发明内容

本发明目的在于提供一种甲磺酸苦柯胺B的含量检测方法。

本发明所建立的液相色谱法检测甲磺酸苦柯胺B的有关物质，通过系统适用性溶液对已知杂质定位，用含校正因子的自身对照法计算已知杂质含量，使有关物质的控制更加严格和准确。

本发明所述的含量检测方法，包括以下步骤：

步骤1，系统适用性溶液制备：取杂质1、杂质2、杂质3及甲磺酸苦柯胺B配制成系统适用性溶液；

步骤2，供试品溶液制备：取甲磺酸苦柯胺B原料药配制成供试品溶液；

步骤3，对照溶液的制备：取供试品溶液配制成对照溶液；

步骤4，分别将系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，得到色谱图；

步骤5，根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供试品溶液中各已知杂质、未知杂质及总杂质的含量；

其中，液相色谱的色谱条件如下：

色谱柱：迪马DiamondC18(250mm×4.6mm，5μm)；

流动相：甲醇-20mM四丁基氢氧化铵水溶液；

检测波长：280nm；

柱温：30℃；

流速：1ml/min

进样量10μL。

色谱条件中，流动相为甲醇-20mM四丁基氢氧化铵水溶液，二者体积比为10:90-20:80，以浓氨水调溶液的pH值范围为2.5-3.5。

具体的，本发明所述的检测方法，步骤如下：

步骤1，系统适用性溶液制备：称取甲磺酸苦柯胺B,杂质1、杂质2、杂质3各1-4mg，同置于12.5-50ml量瓶中，加水适量使溶解，再加水稀释至刻度，摇匀，得到系统适用性溶液；

步骤2，供试品溶液制备：称取甲磺酸苦柯胺B12.5-50mg，置于12.5-50ml量瓶中，加水适量使溶解，再加水稀释至刻度，摇匀，得到供试品溶液；

步骤3，对照溶液的制备：精密量取供试品溶液0.5-2ml，置50-200ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得到对照溶液；

步骤4，注入液相色谱仪：分别精密吸取上述系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液各5-20μl，注入液相色谱仪，得到色谱图；

步骤5，根据系统适用性溶液、对照溶液和供试品溶液的色谱图，经过计算得到供试品溶液中各已知杂质、未知杂质及总杂质的含量；

其中，液相色谱的色谱条件如下：

色谱柱：迪马DiamondC18，型号250mm×4.6mm，5μm；

流动相：甲醇-20mM四丁基氢氧化铵水溶液；

检测波长：280nm；

柱温：30℃；

流速：1ml/min；

进样量10μL；

流动相为甲醇-20mM四丁基氢氧化铵水溶液，二者体积比为10:90-20:80，以浓氨水调溶液的pH值范围为2.5-3.5。

优选的，本发明所述的检测方法，步骤如下：