[发明专利]一种水产养殖用发酵型中草药水质改良剂的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种水产养殖用发酵型中草药水质改良剂的制备方法，其特征是：所述发酵型中草药水质改良剂为液体制剂，由枯草芽孢杆菌CGMCC1.1413和植物乳杆菌CGMCC1.557组成混合菌在一定培养基和发酵温度下与中草药一同发酵，完成后加工成液体制剂；

按重量份计具体步骤如下：

（1）枯草芽孢杆菌的培养：从试管斜面上取一环枯草芽孢杆菌CGMCC1.1413菌苔，接种到50~100mL灭菌的肉汤培养基中，于30~35℃、100~120r·min^-1摇床上培养24~30h；然后将其接入5~8L经灭菌的肉汤培养基中，于30~35℃、100~120r·min^-1摇床上培养24~30h，制成菌种种子液备用；

（2）植物乳杆菌的培养：从试管斜面上取一环植物乳杆菌CGMCC1.557菌苔，接种到50~100mL灭菌的MRS液体培养基中，于32~37℃静置培养30~40h；然后将其接入5~8L经灭菌的MRS液体培养基中，于32~37℃静置培养28~32h，制成菌种种子液备用；

（3）混合菌的组合：取步骤（1）培养至活菌浓度≥10⁸CFU·mL^-1的枯草芽孢杆菌和步骤（2）中培养至活菌浓度≥10⁸CFU·mL^-1的植物乳杆菌各5~8L，放入经灭菌的25L桶中混合，得到菌种混合种子液备用；

（4）中草药的微生物发酵：在1.0吨不锈钢发酵罐中加入总体积600~700L的液体发酵培养基，经121℃灭菌15min后冷却备用；将步骤（3）所得菌种混合种子液10~16L接入发酵罐，在32~37℃、转速40~80r·min^-1的条件下培养28~35h，待菌液浓度≥10⁸CFU·mL^-1时，调pH值为3.2~3.8，用5L塑料桶分装，最后包装入库，得到产品水产养殖用发酵型中草药水质改良剂。

2.如权利要求1所述水产养殖用发酵型中草药水质改良剂的制备方法，其特征是：步骤（1）中所述的肉汤液体培养基为：蛋白胨10g·L^-1，牛肉膏5g·L^-1，NaCl5g·L^-1，调节pH值6.8~7.2，经121℃灭菌20min后冷却备用；

步骤（2）中所述的MRS液体培养基为，牛肉膏10g·L^-1，蛋白胨10g·L^-1，酵母膏5g·L^-1，葡萄糖5g·L^-1，柠檬酸二胺2g·L^-1，吐温801g·L^-1，乙酸钠5g·L^-1，磷酸氢二钾2g·L^-1，硫酸镁0.2g·L^-1、硫酸锰0.05g·L^-1，碳酸钙20g·L^-1，调节pH值6.4~6.6，经121℃灭菌15min后冷却备用；

步骤（4）中所述液体发酵培养基，其组份比例按重量份数计：糖蜜12~18份，大豆粉3~7份，酵母膏3~7份，乙酸钠1~3份，硫酸镁0.1~0.5份，磷酸氢二钾1~2份，中草药12~20份，水50~60份，于室温下在发酵罐中溶解混合，调节溶液pH值至6.4~6.6，121℃灭菌15min，冷却后备用。

3.如权利要求1所述水产养殖用发酵型中草药水质改良剂的制备方法，其特征是：步骤（1）中所得菌种种子液的OD₆₀₀值为0.9~1.2，活菌数≥10⁸CFU·mL^-1；步骤（2）中所得菌种种子液活菌数≥10⁸CFU·mL^-1。

4.如权利要求2所述水产养殖用发酵型中草药水质改良剂的制备方法，其特征是：所述糖蜜中糖分含量≥55%。

5.如权利要求2所述水产养殖用发酵型中草药水质改良剂的制备方法，其特征是：所述中草药为100目以上的粉状混合物，其组份比例按重量份数计：鱼腥草35~45份，金银花12~18份，黄芪10~20份，黄芩10~15份，甘草10~15份。

6.如权利要求1-5之一所述水产养殖用发酵型中草药水质改良剂的制备方法，其特征是：采用乳酸和碳酸氢钠调节pH值。

7.权利要求1所述水产养殖用发酵型中草药水质改良剂的应用，其特征是：将水产养殖用发酵型中草药水质改良剂投放于水质待改善的养殖池塘中，用量为0.5~1kg/亩·米水深，连用3~5天。