[发明专利]一种基于siRNA的双偶联复合物

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于siRNA的双偶联复合物。

背景技术

RNAi疗法能够使得特定的信使RNA(mRNA)沉默，防止产生造成疾病的蛋白质，从而针对疾病根源。RNAi疗法也可能以根本的新方式，治疗疾病和帮助患者。

近年来，基于小分子干扰RNA(siRNA)技术的基因治疗方法取得了成功。由于siRNA可直接在胞浆内进行表达，具有起效快速且给药的时间间隔灵活可控的优点。因此，通过siRNA输送进行基因治疗的相关生物医学技术得到了迅速的发展，这种技术可单独使用以治疗病毒感染性疾病及肿瘤等。

目前作为SiRNA基因输送的载体大多为合成阳离子分子、高分子，其实现基因负载与输送的原理为利用载体阳离子功能分子、高分子中的正电荷(+)与SiRNA基因序列中磷酸基团所携带的负电荷(-)的静电相互作用，结合组装形成稳定的复合物，保护所负载的SiRNA，同时可提高其在体内的稳定性，从而提高SiRNA输送的效率。

然而，到目前为止，虽然国内外已经开发报道了多种阳离子功能分子如阳离子聚合物、阳离子脂质体等，并作为载体应用于体外或体内细胞/组织水平的siRNA输送，但在实际应用中，大多数脂质阳离子功能分子在血液循环中不稳定，容易被网状内皮系统吞噬后清除而导致其失活。且许多阳离子载体具有免疫原性，可刺激、诱导细胞的免疫应激反应，进而导致毒副作用。

发明内容

基于此，有必要提供一种可改善合成基因载体的生物相容性、减低毒性且能增强siRNA转染效果的新型生物功能材料。

一种基于siRNA的双偶联复合物，包括棕榈酸、叶酸，及同时偶联棕榈酸和叶酸的siRNA，双偶联复合物的结构式为：

其中，siRNA的正义链与棕榈酸偶联时，siRNA的反义链与叶酸偶联；siRNA的反义链与棕榈酸偶联时，siRNA的正义链与叶酸偶联。

在其中一个实施例中，叶酸与siRNA之间偶联的连接体为聚乙二醇，双偶联复合物的结构式为：

其中6≤n≤18。

在其中一个实施例中，n＝12，双偶联复合物的结构式为：

这种基于siRNA的双偶联复合物，棕榈酸能结合白蛋白，减少肾脏的滤过，白蛋白能增加所携带的siRNA进入癌细胞，另外，脂溶性棕榈酸能帮助水溶性核酸进入细胞内。而叶酸具有肿瘤靶向的功能，能结合肿瘤表面的叶酸受体，诱导siRNA复合物进入肿瘤细胞，从而抑制致癌基因的表达。

因此，这种基于siRNA的双偶联复合物通过化学修饰核酸，改善了siRNA的生物相容性及毒性，且增强了siRNA的转染效果，此外这种复合物分子小，易于进入肿瘤细胞，且成分明确，易于大规模制备。

附图说明

图1为本发明一对比实验的细胞特异性荧光强度的平均值的柱状对比图；

图2为本发明一对比实验的裸鼠体内肿瘤摄取情况的全身摄影对比图；

图3为本发明一对比实验的siRNA在肿瘤组织中浓度随时间变化的折线图；

图4为本发明一对比实验的siRNA在排泄倒尿液中浓度随时间变化的折线图；

图5为本发明一对比实验的siRNA在不同器官中含量的体外摄影对比图；

图6为本发明一对比实验的肿瘤组织对siRNA摄取24h后的体内与体外摄影对比图。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将用具体实施例对本发明进行更全面的描述。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

一种基于siRNA的双偶联复合物，包括棕榈酸、叶酸，及同时偶联棕榈酸和叶酸的siRNA。

棕榈酸与叶酸分别与siRNA的双链偶联。即当siRNA的正义链与棕榈酸偶联时，siRNA的反义链与叶酸偶联；当siRNA的反义链与棕榈酸偶联时，siRNA的正义链与叶酸偶联。

棕榈酸在合成RNA时加在3’端。叶酸与siRNA之间偶联的连接体为聚乙二醇，siRNA上的炔烃与叶酸链接的聚乙二醇叠氮化物形成稳定的三氮唑键。

这种基于siRNA的双偶联复合物，棕榈酸能结合白蛋白，减少肾脏的滤过，白蛋白能增加所携带的siRNA进入癌细胞。

叶酸具有肿瘤靶向的功能，能结合肿瘤表面的叶酸受体，诱导siRNA复合物进入肿瘤细胞，从而抑制致癌基因的表达。