[发明专利]多肽AFP12在制备抗肿瘤药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及多肽AFP12在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

恶性肿瘤是严重危害人们生命的常见病、多发病，而乳腺癌是女性排名第一的常见恶性肿瘤。据世界卫生组织统计，全球乳腺癌发病率自20世纪70年代末开始一直呈上升趋势。目前我国乳腺癌的发病人数也逐年增多。乳腺癌死亡率随年龄升高而增长，据统计，在我国35岁以上女性乳腺癌患者的死亡率呈上升趋势，在70-75岁左右达到最高。在乳腺癌的治疗中，化学疗法是主要手段，同时也是最有效的一种方法。但是化疗所使用的药物对人体正常细胞伤害极大，一些乳腺癌患者在长期接受化疗之后，身体免疫机能出现问题，且肿瘤对化疗药物也出现一定程度的耐药性，反而对于治疗产生了负面影响。因此，高效低毒的乳腺癌治疗药物的开发是国际抗肿瘤药物研制的热点。

新型抗肿瘤活性多肽具有高亲和力、强特异性、低毒副作用的特点，此外大多数还具选择性靶向肿瘤细胞的性质，因而在临床应用上具有非常重要的开发价值，作为抗肿瘤化合物具有较好的前景。

多肽药物多数源于内源性肽或其他天然肽，因此结构清楚，作用机制明确；与一般小分子化学药物相比具有活性高、用药剂量小、毒副作用低、无代谢异化等特点；与蛋白质类药物相比，较小的多肽免疫原性相对较小；与抗体相比，由于它们体积微小，因此它们更容易渗透到组织中；可化学合成，产品纯度高，质量可控。

发明内容

本发明采用固相化学合成法了获得具有较高抗肿瘤活性的抗肿瘤多肽AFP12。

本发明多肽AFP12氨基酸序列的全序列为：

Ala-Leu-Lys-Ala-Pro-Lys-Cys-Thr-Trp-Thr-Ser-Pro-Lys-Ile-Ser-Arg-Gly-Phe。其分子量为1991.39D，等电点为10.9。

本发明提供了多肽AFP12在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明还提供了多肽AFP12在制备治疗乳腺癌药物中的应用。

本发明还提供了多肽AFP12在制备治疗人乳腺癌MCF-7药物中的应用。

通过MTT实验检测AFP12在细胞水平对乳腺癌细胞的作用，其结果表明AFP12能够明显的抑制MCF-7乳腺癌细胞的生长，且有剂效关系。药效学实验结果表明，AFP12对人乳腺癌MCF-7荷瘤鼠肿瘤的生长具有抑制作用，且毒性较低。运用WesternBlotting技术观察细胞凋亡信号通路中的关键蛋白表达，证实AFP12可以诱导肿瘤细胞的凋亡，以此来产生抗肿瘤作用。AFP12为将来多肽药物的开发奠定了基础，具有显著的社会和市场价值。

附图说明

图1多肽AFP12对人乳腺癌MCF-7细胞的体外抑制活性。

图2多肽AFP12对人乳腺癌MCF-7荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用。

图3多肽AFP12对人乳腺癌MCF-7细胞荷瘤鼠抑瘤率的影响。

图4检测加入多肽AFP12后细胞凋亡相关信号因子变化的WesternBlot图。

具体实施方式

下面通过实例及附图对本发明作进一步详细描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1多肽AFP12的制备

缩略语说明：PIP(哌啶)；DMF(二甲基甲酰胺)；HOBt(1-羟基苯并三唑)；DIC(N，N-二异丙基碳二亚胺)；TFA(三氟乙酸)

1.多肽树脂的合成

制备从C端开始。取王氏树脂于反应器中，加入20％PIP/DMF溶液去保护30min，抽滤得到去Fmoc的树脂。将Fmoc-Phe和缩合剂HOBt用适量的DMF溶解，缓慢加入DIC溶液于室温下反应30min，加入去Fmoc的树脂偶联反应，抽滤得到带一个保护氨基酸的树脂。采用同样的方法依次接入保护氨基酸。最后用20％PIP/DMF溶液去Fmoc保护30min，抽滤既得本发明多肽树脂。

2.多肽粗品的制备

取本发明多肽树脂，加入TFA的裂解试剂室温反应，目的是将多肽从树脂上脱下。将反应混合物抽滤，树脂用TFA洗涤3次，合并滤液后用旋转蒸馏，尽可能除掉TFA，然后加入冰乙醚，会有白色固体析出，冷冻干燥既得本发明多肽的粗品。

3.多肽粗品的纯化