[发明专利]一种从黑果枸杞中制备矮牵牛素的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物的有效成分的分离提取技术领域，具体涉及一种从黑果枸杞中制备矮牵牛素的方法。

背景技术

黑果枸杞(LyciumruthenicumMurr.)系茄科枸杞属植物，是西北干旱地区一种特有的多年生灌木野生植物。其耐干旱，生长于盐碱土荒地、沙地或路旁，可作为水土保持的灌木植物。其果实味甘、性平、清心热，据《四部医典》中记载，藏医将其用于治疗心热病、心脏病、月经不调、停经等病症；民间用作滋补强壮、明目及降压药。现代药理学研究表明黑果枸杞中的多糖具有抗疲劳、降血糖等药理活性；黄酮类化合物具有抗氧化及其他营养保健作用等；原花青素具有抗氧化、抑制肿瘤等功能；花色苷具有抗氧化、抗突变、抑制流感病毒和疱疹病毒等活性。

黑果枸杞色素中主要为酰基化的锦葵色素-3，5-二葡萄糖苷。经紫外分光光度法、质谱和文献报道综合分析鉴定出黑果枸杞中含有8种花色苷，分别是:飞燕草素-3-O-葡萄糖苷、芍药素-3-O-葡萄糖苷、矮牵牛素-5-O-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-O-(6-O-对香豆酰)芸香糖苷-5-O-葡萄糖苷、锦葵色素-3-O-(6-O-对香豆酰-3-O-乙酰)-5-O-二葡萄糖苷、飞燕草素-3-O-(6-O-乙酰)葡萄糖苷、锦葵色素-3-O-(6-O-对香豆酰)葡萄糖苷和锦葵色素-3，5-二葡萄糖苷，其含量依次为0.86%、1.17%、2.38%、11.79%、68.35%、0.63%、5.24%、9.58%。花色苷是黑果枸杞中重要的组成成分。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从黑果枸杞中制备矮牵牛素的方法，为黑果枸杞矮牵牛素的进一步深化应用，提供了一条有效制备途径。

为了实现上述目的，本发明的技术解决方案为一种从黑果枸杞中制备矮牵牛素的方法，其中包括以下步骤：

（1）将干燥后的黑枸杞粉碎60～80目粉末，用丙酮减压加热回流提取至少两次，然后浓缩得浸膏；每次提取时间至少90min，所述的丙酮用量至少是原料的4～8倍，提取时，真空度0.7～0.1MPa，温度50～80℃。浓缩条件：真空度范围0.7～0.1MPa，温度不高于75℃，浓缩至比重为1.0；

（2）将浓缩浸膏用酸水解或者酶水解，水解完毕后，倾倒上清液，收集沉淀膏；酸法水解工艺条件为:盐酸浓度1-5mol/L，水解温度70-95℃，水解时间120-240min；

酶法水解工艺条件为:pH5.5-6.5，酶解温度35-55℃，酶解时间90min，加酶量为浓缩浸膏重量的1-3%，酶为具有水解糖苷键功能的纤维素酶；

（3）将沉淀用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯和沉淀的体积比为1.5-3∶1，萃取1-4次；

（4）将乙酸乙酯萃取液浓缩得到的浸膏，置于超临界萃取仪的萃取釜中使用超临界CO₂作为溶剂，用无水乙醇作为夹带剂，得到矮牵牛素高纯度萃取物。萃取压力控制在30～60MPa，温度控制在30～50℃，CO₂流量控制在10～20L/h，萃取时间控制在80～100min。

本发明方法的工艺路线合理，产品收率高，提供了一条可行的能产生经济效益的途径。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，但这些实施例仅限于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。

实施例1

本发明含一种从黑果枸杞中制备矮牵牛素的方法实施例，其制备步骤为：

（1）取干燥的黑枸杞原料200g，破碎至60目后投入提取罐中；加入丙酮800ml，减压，加热至75℃，回流提取两次，每次60min，合并两次提取液浓缩得浸膏；

（2）将浓缩浸膏用酸水解，水解完毕后，倾倒上清液，收集沉淀；酸法水解工艺条件为:盐酸浓度2mol/L，水解温度85℃，水解时间180min；

（3）将沉淀用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯和浓缩液的体积比为2.5∶1，萃取2次；

（4）将乙酸乙酯萃取液浓缩得到的浸膏，置于超临界萃取仪的萃取釜中使用超临界CO₂作为溶剂，用无水乙醇作为夹带剂，得到矮牵牛素高纯度萃取物。萃取压力控制在35MPa，温度控制在40℃，CO₂流量控制在10L/h，萃取时间控制在100min。真空干燥，得到矮牵牛素提取物25.72mg。

经检测，Waters高效液相色谱仪，色谱柱C18（4.6mm×250mm，5um），流动相为0.2%甲酸溶液：乙腈=98:2；检测波长为525nm。矮牵牛素含量为72.2%。

实施例2