[发明专利]同时定量检测三聚氰胺和三聚氰酸含量的方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及食品检测领域，特别是涉及一种对三聚氰胺和三聚氰酸含量的同时定量检测方法及这种方法的应用。

背景技术

三聚氰胺(Melamine)俗称蛋白精，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，常见的化工原料，可用于合成塑料、涂料、纺织物防摺防缩处理剂、耐热装饰薄板、防潮纸、灰色皮革鞣皮剂等。三聚氰胺对人体(尤其是婴幼儿)的泌尿系统、生殖系统有毒性，甚至可以导致死亡，因此，国家食品质量监督检验中心明确指出，三聚氰胺属于化工原料，不允许添加到食品中。

蛋白质是维持生命活动最需要摄入的营养物质之一，主要由氨基酸组成，其含氮量一般不超过30％。现阶段通用的蛋白质测试方法采用“凯氏定氮法”，是通过测出含氮量来估算蛋白质含量。于是，一些不法商家在利益的驱使下，为了使蛋白含量不达标的食品通过蛋白含量测试，就在食品中添加含氮量为66.7％的三聚氰胺以增大食品中的含氮量。

三聚氰酸(Cyanuricacid)也是一种三嗪类含氮杂环有机化合物,也是常用化工原料，主要用作除草剂、杀菌剂、漂白剂等的成分或原料。由于三聚氰酸可以被反刍类动物消化，因此也被广泛添加到动物饲料中。奶牛食用添加有三聚氰酸的饲料或喷洒过三聚氰酸除草剂的青草，分泌出的牛奶里就会含有三聚氰酸。目前已经在宠物饲料及刚挤出的牛奶里检测到三聚氰酸。

研究表明，单独摄入三聚氰酸或三聚氰胺的急性毒性很低，但同时摄入两者比单独摄入两者之一对肾功能和肝脏组织的损伤要严重得多，这是因为三聚氰胺和三聚氰酸可以通过分子间氢键生成难溶于水的网状结构晶体，三聚氰胺在人体内还能与三聚氰酸结合生成难溶的氰尿酸三聚氰胺复合物,形成结石堵塞肾小管，损伤肾脏，造成肾脏衰竭。因此食品中三聚氰胺和三聚氰酸含量的检测有重要的实际意义。

由于三聚氰胺和三聚氰酸共存时容易生成沉淀，在同时检测二者的过程中若溶剂使用不当，两者结合成沉淀，最终得到的检测结果是沉淀后样品中两者的余量，而非真实含量，检测结果严重偏离真实值，致使检测结果不可靠。目前，同时测定三聚氰胺和三聚氰酸含量的方法主要是液相色谱串联质谱法，这种方法用的溶剂和流动相对仪器的色谱柱损伤很严重，大大缩短了色谱柱的使用寿命；加之液相色谱串联质谱法用到的仪器设备造价高昂，而检测的条件对仪器伤害很大，增加了检验成本，不利于大规模样品的测定；此外，这种方法样品制备过程繁琐，还很容易造成三聚氰胺和三聚氰酸的沉淀，使检测过程难度增加。

因此，尽快探索出一种能够准确、简便、同时检测三聚氰胺和三聚氰酸含量的方法成为本领域技术人员需要攻克的难题。

发明内容

本发明的主要目的是针对现有技术中存在的技术缺陷，提供一种操作简便、结果准确可靠的能够同时定量检测三聚氰胺和三聚氰酸的方法。

为实现本发明的目的所采用的技术方案是：

同时定量检测样品中三聚氰胺和三聚氰酸含量的方法，包括以下步骤：

(1)配制标准溶液：分别用溶剂配制多个三聚氰胺浓度和三聚氰酸浓度分布在0-120μg/mL的三聚氰胺标准溶液和三聚氰酸标准溶液；其中，所述溶剂为1％(质量体积百分含量，w/v，g/100mL)的三氯乙酸水溶液或盐酸水溶液与乙腈混合配制而成的；或10mM的氢氧化钠水溶液或氢氧化钾水溶液与乙腈混合配制而成的；

(2)用高效液相色谱(HPLC)检测步骤(1)中各标准溶液的峰面积，紫外检测波长为213nm；

(3)以标准溶液的浓度为横坐标，以对应的峰面积为纵坐标，分别绘制出三聚氰胺标准曲线和三聚氰酸标准曲线，并得到对应的标准曲线方程；

(4)将样品用步骤(1)中所述溶剂稀释或溶解成样品溶液，用HPLC检测样品溶液的峰面积后，将峰面积数值带入步骤(3)得到的对应的标准曲线方程中，即得到样品中三聚氰胺和三聚氰酸的含量。

所述溶剂中1％(质量体积百分含量，w/v，g/100mL)的三氯乙酸水溶液或盐酸水溶液与乙腈的体积比为(2.5-3.5):1；优选的，所述溶剂中三氯乙酸水溶液或盐酸水溶液与乙腈的混合体积比为3:1。

所述溶剂中10mM的氢氧化钠水溶液或氢氧化钾水溶液与乙腈的体积比为(0.8-1.2):1；优选的，所述溶剂中氢氧化钠水溶液或氢氧化钾水溶液与乙腈的混合体积比优选为1:1。

步骤(2)中高效液相色谱的流动相为10mM的乙酸铵水溶液与乙腈按体积比10:90-20:80混合配制而成的混合液；所述流动相中乙酸铵水溶液与乙腈的混合体积比优选15:85。