[发明专利]一种大豆转化不定芽生根的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种大豆转化不定芽生根的方法。

背景技术

大豆通称黄豆，豆科大豆属一年生草本。原产中国，中国各地均有栽培，亦广泛栽培于世界各地。大豆是中国重要粮食作物之一，中国东北为主产区，是一种其种子含有丰富植物蛋白质的作物，大豆最常用来做各种豆制品、榨取豆油、酿造酱油和提取蛋白质。豆渣或磨成粗粉的大豆也常用于禽畜饲料。

20世纪80年代，孟山都公司研究人员从矮牵牛中克隆获得了抗性基因(EPsPs基因)，并用农杆菌介导法将矮牵牛的EPsPs基因导人大豆基因组中，进而培育出抗草甘膦大豆品种。1994年，孟山都公司培育的抗草甘膦转基因大豆首次获得美国商业化种植许可。转基因大豆自推广以来，种植面积一直高居各类转基因作物之首，是世界上最早商品化、推广应用速度最快的转基因作物。

大豆转基因要经过基因导入、转化不定芽诱导、不定芽伸长、不定芽生根、植株移栽生长至开花结荚获得转基因后代。大豆转化不定芽的生根及移栽后的成活率是影响大豆转基因成功的关键环节之一。在已公开的植物转基因技术中，大豆转化不定芽生根至植株成熟一般经过以下步骤：(1)将不定芽生切下转移到生根培养基中进行生根培养；(2)从培养瓶中取出生根的大豆再生苗，洗净根上的培养基，(3)进一步移栽到基质中；继续培育使新叶发生幼苗健壮；(4)然后移植到土壤中，正常管理直到结荚。在这其中，生根诱导对于形成完整的植株至关重要，是芽苗能否自主生长的关键步骤，通过再生植株的自主营养吸收和根毛吸收的养分供应，芽苗才能够健康地生长发育、长成健壮的植株。

目前上述生根技术中普遍应用的生根培养基以MS或B5为基本培养基，其中单独添加吲哚丁酸(IBA)0.2-1.0mg/L，或者单独添加萘乙酸(NAA)0.37-1.0mg/L。

关于大豆转化不定芽的生根技术的研究，主要有朱木兰等人发明的“大豆转基因株系混合生根方法”(申请号：CN201310222316.0)、杨跃生等人发明的“一种解决大豆转化不定芽条难以生根的无菌嫁接方法”(申请号：CN201210368585.3)和姜国勇发明的一种大豆组织培养分化苗的生根方法(申请号：CN201410349357.0)，以上生根技术中均需要在密闭培养瓶中的无菌培养基上生根。现有技术中，需要配制固体生根培养基，技术复杂且在大豆不定芽转接到培养基以及后续的培养过程中容易感染细菌，固体生根培养基的培养环境是在密闭的培养瓶中，不利于再生苗生长的生理代谢，抑制再生苗的发根，并且在固体生根培养基中培养的不定根与正常根系相比，质量差并且没有根毛，吸收功能差。在瓶内密闭环境下培育的生根苗存活能力弱，通常要经过瓶外驯化的过程，然后再进行定植，在此过程中，有一些生根苗因不适应外部环境而死亡，导致移栽成活率降低。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明目的第一目的在于提供一种大豆转化不定芽生根的方法，该方法具有操作简单、改善生根质量、提高转化大豆不定芽的生根率以及再生大豆苗的成活率等优点。同时，避免了密封的容器环境对再生苗的发根抑制以及对再生苗生长和生理代谢的不利影响，避免再生苗在生根过程中染菌，培育出健壮的再生苗。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种大豆转化不定芽生根的方法，包括以下步骤：将大豆转化不定芽的下端浸泡在生根液中，然后将浸泡后的大豆转化不定芽植入不封闭的育苗钵中，覆膜，进行光照培养，待长出新叶后，揭膜，继续培养至生根壮苗。