[发明专利]一种二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法

说明书

技术领域

本发明属于手性色谱分离技术领域，更具体地，涉及一种二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法。

背景技术

二氢杨梅素(Dihydromyricetin，见式I(a))是一种黄酮类化合物，其化学名为(2R,3R)-3,5,7-三羟基-2-(3,4,5-三羟基苯基)苯并二氢吡喃-4-酮。1940年Kotake和Kubota等首先从楝叶玉葡萄(A.Meliaefolia)的叶中分离得到。二氢杨梅素作为一种不可多得的天然活性物质，具有抗炎抗过敏、抗氧化[现代食品科技，2014，(10)：36-41；食品科学，2014，(20)：69-71]、止咳祛痰[中国民族医药杂志，1998，(3)：42-44]、镇痛[福建医学杂学，1995，(4)：39-40]、抑菌[食品科技，2008，(4)：140-143]、降血脂[茶叶科学，2007，(3)：221-225]、抗脂质过氧化[中国中药杂志，2003，1188-1191]、抗肿瘤[中华中医药学刊，2010，(9)：1914-1915]、保肝护肝[食品科学，2008，(11)：622-625]等生理活性，具有很高的开发利用价值和应用前景。

二氢杨梅素大量存在于蛇葡萄属植物，如显齿蛇葡萄、粤蛇葡萄、羽叶蛇葡萄、东北蛇葡萄、光叶蛇葡萄等植物中，特别是在显齿蛇葡萄植物的幼嫩茎叶中其含量可达30％以上。目前，主要通过热水提取后重结晶纯化[现代食品科技，2009，(10)：1124-1128；食品科技，2011，(6)：230-233；现代食品科技，2009，(8)：907-910]、乙醇浸泡辅助法[广东化工，2006，(10)：5-9]、微波萃取[广州化工，2005，(2)：12-15；天然产物研究与开发，2005，(5)：636-638]、低温-超声提取[中国发明专利申请201310391546.X]、微波逆流提取及膜提取[中国发明专利申请201210229991.1]、以水为萃取剂的逆流提取[食品科技，2004，(11)：192-194]、超临界流体萃取法[沈露，天津科技大学硕士论文，2006]等方法从蛇葡萄属植物中提取和纯化二氢杨梅素。

天然的二氢杨梅素具有确定的绝对构型，文献中常采用反相液相色谱法(即C₁₈柱或ODS柱，以乙腈/水或甲醇-水-磷酸为流动相)对二氢杨梅素产品进行纯度和含量检测，不对绝对构型做进一步确认[Process Biochemistry，2006，41(3)：567-570；Journal of Chromatography A，2002，973(1)：217-220；湖南农业大学学报，2002，(1)：32-34；中成药，2004，(3)：210-212；广东农业科学，2013，(19)：90-93]。然而，有文献报道在沸水提取、重结晶纯化时，天然二氢杨梅素发生消旋化，(2R,3R)-二氢杨梅素和(2S,3S)-二氢杨梅素(式I(b))同时析出，形成外消旋产物[Acta Crystallographic，2007，E63(11)：o4384和中国发明专利申请201510062355.8]。在中国发明专利申请201510062355.8，发明人首次开发以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂、在甲醇-磷酸的流动相中添加手性添加剂即β-环糊精的RP-HPLC拆分法对二氢杨梅素进行光学纯度检测，结果表明多种市售产品的光学纯度(e.e％)为0。

由于二氢杨梅素分子中含有多个羟基和芳香环，易与手性选择剂和硅胶产生较强的氢键和π-π等相互作用，难被流动相洗脱和拆分，迄今未见直接采用手性色谱柱对二氢杨梅素进行手性分析分离的研究报道。另一方面，手性化合物的立体构型可能对其生理活性、毒性和临床疗效等产生极大影响。因此，在手性色谱柱上，开发一种二氢杨梅素对映体的手性分离方法显得尤为重要。

发明内容

根据目前二氢杨梅素对映体手性拆分技术中的不足，本发明提供了一种二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法。

本发明的技术目的通过以下技术方案实现：

本发明提供一种二氢杨梅素对映体的手性色谱分离分析方法，包括如下步骤：二氢杨梅素样品溶解在流动相中，采用多糖衍生物手性固定相进行液相色谱分析分离；

所述流动相为正己烷和低级醇的混合溶液；

所述多糖衍生物手性固定相为涂覆三(3，5-二甲基苯氨基甲酰化)直链淀粉、三((S)-(ɑ)-苯乙基氨基甲酰化)直链淀粉、三(3，5-二甲基苯氨基甲酰化)纤维素或三(4-甲基苯基氨基甲酰化)纤维素手性固定相中的一种。