[发明专利]一种十肽及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物制药与化妆品等领域，具体涉及一种合成多肽及其应用。

背景技术

生物活性肽是具有多种人体代谢和生理调节功能，易消化吸收，有促进免疫调节、抗菌、降血压、抗癌、抗氧化等作用的二肽到复杂的线性、环形结构的不同肽类的总称，由25个天然氨基酸通过肽键以不同组成和排列方式构成。活性肽安全性极高，是当前国际食品界最热门的研究课题和极具发展前景的功能因子。现代营养学表明，蛋白质经消化道酶作用后并不完全以游离氨基酸的形式吸收，大多以低肽的形式吸收，并且低肽比游离氨基酸具有更高的营养价值和生物效价。

构建细胞氧化损伤模型是评价样品是否具有抗氧化能力的常用方法，而红细胞由于来源丰富、取材方便，是体外生物实验中的常用材料。自由基首先攻击红细胞膜上的脂质和蛋白质，使细胞膜破损，释放出红细胞中的血红蛋白，称为红细胞溶血。AAPH、H₂O₂和 Hemin为常用的诱导红细胞溶血的物质。

原子力显微镜(AFM)是一种高分辨率的新型成像工具，在生物医学界已被广泛用于细胞形貌及其超微结构的表征，其原理是通过检测探针扫描样品时所产生的原子间相互作用力来获得样品形貌结构信息，经计算机软件处理成像。自由基攻击细胞膜使之结构和功能丧失，发生细胞溶血。这一结论通过用原子力显微镜（AFM）观察对照组、损伤组和保护组红细胞形貌得到进一步验证。

皮肤老化主要是人的遗传倾向性(也称为年代老化)和人对环境应激的生理反应(也称为光老化)的结果。光老化是外界环境对皮肤的生物学应答的效果。皮肤对光老化的应答通常与正常的水合作用的缺乏、皮肤下垂以及线条和皱纹外观有关。UVB 照射可使成纤维细胞内活性氧(reactive oxygen species，ROS)堆积，超过了其清除能力，打破氧化与抗氧化平衡，发生氧化应激反应，调节一系列程序化的细胞反应，甚至调控衰老相关的信号通路，促进细胞衰老的发生。大量研究表明ROS 在细胞内的堆积是皮肤光老化发生发展过程中的重要环节。人皮肤成纤维细胞是人皮肤产胶原蛋白的主要场所，其数量的多少和细胞胶原蛋白的产率与皮肤衰老状态息息相关。因此，人皮肤成纤维细胞的存活率和胶原蛋白的产率是被广泛认可的一种评价皮肤衰老状态的模型。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有保护红细胞溶血以及促进人皮肤成纤维细胞的增殖和胶原蛋白产生的合成多肽，可应用于生物制药与化妆品等领域。

本发明以APPH 诱导的红细胞溶血实验以及紫外损伤人皮肤成纤维细胞来评价多肽的抗氧化及抗皮肤衰老活性。

本发明所述的合成多肽缩写为VTAPAASVAL，分子量899.4，序列为：Val-Thr-Ala-Pro-Ala-Ala-Ser-Val-Ala-Leu。其中，

Val表示英文名称为Valine，中文名称为缬氨酸的氨基酸的相应残基；

Thr表示英文名称为Threonine，中文名称为苏氨酸的氨基酸的相应残基；

Ala表示英文名称为Alanine，中文名称为丙氨酸的氨基酸的相应残基；

Pro表示英文名称为proline，中文名称为脯氨酸的氨基酸的相应残基；

Ser表示英文名称为Serine，中文名称为丝氨酸的氨基酸的相应残基；

Leu表示英文名称为Leucine，中文名称为亮氨酸的氨基酸的相应残基。

本发明所述的氨基酸序列采用标准 Fmoc 方案，通过树脂的筛选，合理的多肽合成方法。将目标多肽的 C-端羧基以共价键形式与一个不溶性的高分子树脂相连，然后以这个氨基酸的氨基作为起点，与另一分子氨基酸的羧基作用形成肽键。不断重复这一过程，即可以得到目标多肽产物。合成反应完成后，去除保护基，将肽链与树脂分离，即得到目标产物。多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程，固相合成顺序从C端向N 端合成。合成完毕，采用高效液相色谱进行纯化，液氮速冻，真空冷冻干燥，得到多肽成品。

本发明将终浓度为1-100 µg/mL 的合成多肽与正常人血红细胞混匀，孵育，经AAPH损伤2 h 后，使得细胞溶血抑制率达到57.74%~80.66%。用100 µg/mL的合成多肽处理后的与仅用AAPH损伤的红细胞组相比，其形貌比单纯AAPH处理组光滑，有序，SOD 活力由 2.5976 mgprot/mL上升到5.2740 mgprot/mL，结果表明，合成多肽处理后红细胞的SOD活性有较大提高，能在生物医药与化妆品等领域应用。