[发明专利]一种间歇浸没式苦苣苔叶片不定芽诱导方法

权利要求书

1.一种间歇浸没式苦苣苔叶片不定芽诱导方法，其包括如下步骤：

1）将苦苣苔科植物叶片进行表面灭菌；

2）将表面灭菌的苦苣苔科植物接种于固体基本培养基中培养7－10天进行无菌外植体筛选；

3）将已确定无污染的苦苣苔科植物叶片置于连通器式间歇式植物组织培养装置内进行间歇浸没式培养；

所述的连通器式间歇式植物组织培养装置包括培养容器装置、载物构件和运输配件，所述的培养容器装置包括容器主体以及通过螺纹啮合的密封盖体；所述密封盖体顶部设有气体交换的通孔；所述容器主体侧壁的一端其底部与顶部均各设一外伸开孔；所述载物构件包括载物筛盘以及固定框架，单个载物筛盘通过多个摞叠置于固定框架内，而固定框架再搁置于所述容器主体内；所述的运输配件包括硅胶软管、蠕动泵和储液容器，通过两条硅胶软管与所述的容器主体、蠕动泵、储液容器相连接，所述固定框架包括空心圆盘底座、垂直焊接于圆盘直径两边的固定杆和连接固定杆的提手；所述的空心圆盘底座包括空心圆环以及由空心圆环圆心辐射出三条两两角度为120度且与空心圆环相接的焊接杆，且焊接杆连接于空心圆环的位置再垂直向下延伸出支腿，

其中，所述连通器式间歇式植物组织培养装置使用前，整体或各个部件经高温高压灭菌，将表面灭菌的苦苣苔科植物叶片平铺于灭菌后的载物筛盘上，每个载物筛盘放置30－50叶片，将多个装有叶片的载物筛盘摞叠并置于固定框架内，再将其放入容器主体内，使用盖体密封。

2.如权利要求1所述的苦苣苔叶片不定芽诱导方法，其特征在于，所述通孔的向下延伸管内装有杀菌纤维团和微孔滤膜，底部由不封口的螺纹塞固定。

3.如权利要求1所述的苦苣苔叶片不定芽诱导方法，其特征在于，两条硅胶软管使所述的容器主体与储液容器相连接，其中，第一条硅胶软管一端与容器主体底部外伸开孔相连，另一端与储液容器下部开口相连；第二条硅胶软管一端与容器主体顶部外伸开孔相连，另一端与储液容器上部开口相连；所述第一条硅胶软管嵌入蠕动泵。

4.如权利要求3所述的苦苣苔叶片不定芽诱导方法，其特征在于，所述储液容器还设置有液体培养基注入口。

5.如权利要求1所述的苦苣苔叶片不定芽诱导方法，其特征在于，所述培养容器装置整体为透明可高压灭菌PC材质。

6.如权利要求1所述的苦苣苔叶片不定芽诱导方法，其特征在于，设置间歇式培养的程序，分别设为早上9－10点和晚上21－22点各1个小时，蠕动泵会在设定时间内将储液容器内的培养基推入与排出容器主体。

7.如权利要求1所述的苦苣苔叶片不定芽诱导方法，其特征在于，每培养5-15天，更新储液容器内的液体培养基。