[发明专利]一种具有增强免疫功能浒苔多糖的制备方法及应用

说明书

本发明提供了一种具有增强免疫功能浒苔多糖的制备方法及其应用。该浒苔多糖的制备方法包括浒苔粗多糖提取、浒苔粗多糖脱蛋白、高速离心法去除小分子杂质、高速离心法去除小分子杂质、氧化法脱去色素以及Sephacryl‑300凝胶层析柱纯化多糖等步骤。本发明提供了一种方法简单、性能稳定、成本低廉、药用价值大，能提高免疫力等特点的一种浒苔多糖其制备方法。尤其是采用提取、纯化的制备方法，以及体外免疫活性筛选和免疫抑制动物实验，获得浒苔多糖及其提炼方法，阐明了此种浒苔多糖可增强免疫抑制小鼠的免疫功能的作用，为有效地开发了浒苔的药用价值和用途，治理环境污染，降低清理成本，提高社会和经济效益提供了新方法。

技术领域

本发明属于生物制品技术领域，具体涉及一种具有增强免疫功能浒苔多糖的制备方法及应用。

背景技术

浒苔(Enteromorphaprolifera)是一种大型药食兼用的藻类植物，属绿藻门石莼目石莼科，在全球范围内分布广泛，我国则主要分布于东南沿海地区。该藻生长和繁殖性能非常强，其生长需要大量的空间，使得海洋中的其它需光藻类生物无法存活，造成大量藻体死亡；浒苔类植物的死亡可使水体的富营养化，其降解过程能大量消耗氧气，导致水体中溶氧快速下降，鱼类因缺氧而窒息死亡；水体富营养化还能造成其它藻类植物大量繁殖，影响沿海的自然景观。因此，浒苔大量增殖将对海洋生态系统造成严重破坏。浒苔多糖的获得和应用有效地开发了浒苔的药用价值和用途，治理了环境污染，降低了清理成本，提高了社会和经济效益。

经研究发现，浒苔营养丰富，含有多种活性功能成分，药用价值高，开发潜力大。浒苔多糖是其主要活性成分，具有增强免疫功能生物学活性。由于浒苔多糖结构非常复杂，而且对于不同提取和纯化分离工艺，所得多糖结构与组分之间也存在很大差异，如何提取纯化获得具有增强免疫功能的浒苔多糖的制备方法一直是个研究热点问题。

发明内容

本发明公开了一种具有增强免疫功能浒苔多糖的制备方法及应用，该方法从浒苔中提取的多糖应用于免疫抑制小鼠可显著改善环磷酰胺诱导的小鼠免疫抑制增强免疫活性。此制备方法简单、性能稳定、成本低廉、药用价值大，对于促进浒苔资源的综合利用、天然药物和保健品的研究和开发以及海洋生态保护具有十分重要的意义。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种具有增强免疫功能浒苔多糖的制备方法，其特征在于，按照如下步骤进行：

1)浒苔粗多糖提取：称取浒苔干品，加入20倍水，于90℃提取三次，每次2h，纱布过滤，取浸提液旋转蒸发浓缩到原体积1/6，再加入3倍体积95％乙醇，4℃过夜，得白色絮状沉淀，冷冻干燥，即为浒苔粗多糖；

2)浒苔粗多糖脱蛋白：将浒苔粗多糖溶于蒸馏水，于60℃水浴中加热溶解，冷却后调整溶液pH值到6.5，加入木瓜蛋白酶，浒苔粗多糖终浓度为3％，50℃恒温水浴2.5h后，将溶液于90℃，加热5min，灭活木瓜蛋白酶，冷却至室温后，加入1/4V的Sevage试剂、即氯仿：正丁醇为4：1的试剂，反复震荡萃取30min后，3000r/min离心15min，溶液分层，最上层是多糖溶液，中间凝胶层即为变性的蛋白质，最下层为有机溶剂，收集最上层溶液，反复多次萃取，直到没有凝胶层为止，减压浓缩除掉上清液中有机试剂；

3)高速离心法去除小分子杂质：先用浓氨水调整多糖液pH至8.0，再向其中加入10％的过氧化氢溶液同时快速搅拌，直至溶液变为淡黄色，50℃以下保温2h脱色素，降至室温，将多糖溶液于6000r/min离心15min，去除小分子杂质；

4)浒苔多糖透析除盐：将多糖溶液装入阻滞分子量为3500Da的透析袋里，用蒸馏水透析，2h后更换一次透析液，4℃过夜；次日用8000Da的聚乙二醇浓缩糖液至1/3体积后，反复用蒸馏水清洗透析袋表面，收集浓缩的多糖溶液，低温干燥，得浒苔多糖的粗制品；