[发明专利]阻止菜豆凝集素聚合并抑制凝血毒性的多肽及其基因和用途

说明书

本发明公开了一种阻止菜豆凝集素聚合并抑制凝血毒性的多肽及其基因和应用，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明通过计算机模拟实验和生化实验定量研究菜豆凝集素凝血毒性的强弱，并利用Fmoc固相合成的方法合成多肽，设计的多肽具有阻断菜豆凝集素二聚体形成，从而抑制菜豆凝集素的凝血毒性。

技术领域

本发明涉及医学生物工程领域，具体地指一种阻止菜豆凝集素聚合并抑制凝血毒性的多肽及其基因和用途。

背景技术

普通菜豆(Phaseolus vulgaris L.)含有碳水化合物、矿物质、多种维生素和人体必需氨基酸等，在营养缺乏的发展中国家是重要的植物蛋白来源，在发达国家是调整膳食结构的食品，因此，普通菜豆是全球重要的食用豆类之一。

菜豆中毒是一种严重危害人类健康的现象。研究表明，菜豆中的菜豆凝集素会形成二聚体复合物结合，从而凝集血细胞，引发中毒现象。凝集素中毒潜伏期一般在2-4小时，会出现恶心、呕吐、腹痛腹泻、头疼、头晕、心慌胸闷、出冷汗、手脚发冷、四肢麻木、畏寒等症状。目前常用的方法是在高温中破坏分解凝集素二聚体结构，从而使凝集素丧失凝血毒性。然而，菜肴烹饪过程中不注意火候温度而产生的人中毒现象与牲畜因食用含有凝集素植物而产生的中毒现象屡次发生，严重危害人类健康，并造成大量的经济损失。

因此，为满足社会需求，急需研发阻止菜豆凝集素聚合并抑制凝血毒性的相关药物。

发明内容

本发明所要解决的技术问题就是提供一种阻止菜豆凝集素聚合并抑制凝血毒性的多肽及其基因和应用，本发明通过计算机模拟实验 和生化实验定量研究菜豆凝集素凝血毒性的强弱，并利用Fmoc固相合成的方法合成多肽(具体见步骤3)或者通过基因序列转录翻译得到该多肽，设计的多肽具有阻断菜豆凝集素二聚体形成，从而抑制菜豆凝集素的凝血毒性。

为解决上述技术问题，本发明提供的一种阻止菜豆凝集素聚合并抑制凝血毒性的多肽，所述多肽的氨基酸序列为丝氨酸-苯丙氨酸-异亮氨酸-缬氨酸-丝氨酸，如SEQ IDNO：1所示

本发明还提供了一种编码上述多肽的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

最优选，其核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

将上述核苷酸序列插入原核表达载体pET30中得到重组载体，再将导入大肠杆菌中，其表达纯化得到阻止菜豆凝集素聚合并抑制凝血毒性的多肽。(该方法见分子克隆手册)

此外，应当理解，鉴于密码子兼并性及物种具有密码子偏好性的特点，本领域技术人员，可以根据需要使用适合特定物种表达的密码子。

本发明还提供了一种上述的多肽在制备及其抗凝血和植物凝集素有关疾病的药物中的应用。如该多肽可作为抗凝血的解毒剂，并可作为饲料添加剂等，减少因凝血毒性而造成的生命和财产损失。

如将抗凝血多肽的粉末用PBS缓冲液配成终浓度为0.05mg/mL的溶液，得到制剂，从而治疗抗凝血和植物凝集素有关疾病。

本发明的理论基础：

1)本发明通过计算机模拟研究可从分子层次解释菜豆凝集素的凝血功能，为设计抗凝血多肽提供重要的理论基础和物理模型。

2)生化实验可定量测定菜豆凝集素的凝血毒性。

3)多肽可阻止菜豆凝集素聚合物形成，并降低凝血毒性。

本发明的有益效果在于：

1)本发明的多肽能判别植物凝集素的凝血毒性强弱。

2)本发明的多肽能作为抗凝血抑制剂，从而降低人中毒的风险。

3)本发明的多肽能作为动物饲料添加剂，从而减少因为凝血毒性问题造成的经济损失。