[发明专利]一种鸡传染性鼻炎二价蜂胶灭活疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种鸡传染性鼻炎二价蜂胶灭活疫苗，包括抗原和佐剂，其特征在于，所述抗原为副鸡禽杆菌WF株和YC株的菌株的抗原浓缩灭活，配苗时每毫升疫苗中各菌株的菌数≥2.0×10⁹CFU，所述佐剂为蜂胶乙醇浸出液，配苗时每毫升疫苗中蜂胶干物质含量为8mg。

2.根据权利要求1所述的二价蜂胶灭活疫苗，其特征在于，所述副鸡禽杆菌WF株和YC株的菌株抗原液灭活前活菌数≥3.0×10⁹CFU/mL。

3.根据权利要求1所述的二价蜂胶灭活疫苗，其特征在于，所用佐剂为优质蜂胶，经乙醇浸提获得。

4.一种鸡传染性鼻炎二价蜂胶灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)蜂胶乙醇浸出液制备：蜂胶在低温下贮存，使用时先将蜂胶置-15℃冷冻24-48h，再用冷冻粉碎机磨碎过筛，按1:4的比例加入95％乙醇，在37℃浸提48-72h，冷却、过滤，即得纯净蜂胶乙醇浸出液，浸出液的蜂胶干物质含量≥32g/mL；

(2)制备生产用菌种：将副鸡禽杆菌WF株和YC株的菌种进行繁殖制备生产用菌种，并对该生产用菌种进行纯粹检验；

(3)制备抗原液：将步骤(2)的生产用菌种分别接种到相应的制苗用培养基培养，制备抗原液；并进行纯粹检验；

(4)活菌计数：分别从步骤(3)所获得的两种抗原液中取样，对副鸡禽杆菌WF株和YC株的菌株进行活菌计数，以确定培养的菌数；

(5)浓缩：将上述两种抗原液分别用中空纤维滤器浓缩，制得抗原浓缩液；

(6)灭活：两种抗原液经硫柳汞灭活制得灭活抗原液，并进行灭活检验；

(7)疫苗成品完成：根据各菌株菌液活菌计数结果,每毫升疫苗中各菌株菌数含量2.0×10⁹CFU的配苗标准，分别量取所需量的副鸡禽杆菌WF株、YC株浓缩液，按照每毫升疫苗中含蜂胶干物质8mg的标准量取蜂胶乙醇浸出液，浸出液的蜂胶干物质含量须≥32g/mL，用注射用水补充至10万毫升；2000rpm搅拌5分钟，然后缓慢加入蜂胶乙醇浸出液，继续2000rpm搅拌15～20分钟，使其充分混合乳化，制得所述鸡传染性鼻炎二价蜂胶灭活疫苗。

5.根据权利要求4所述的一种鸡传染性鼻炎二价蜂胶灭活疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中制得抗原浓缩液含菌数应≥6.0×10⁹CFU/mL。

6.根据权利要求4所述的一种鸡传染性鼻炎二价蜂胶灭活疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中抗原浓缩液为副鸡禽杆菌WF株和YC株的菌种抗原液的3-4倍浓缩。

7.根据权利要求5所述的一种鸡传染性鼻炎二价蜂胶灭活疫苗的制备方法，其特征在于，所述的步骤(7)的佐剂为蜂胶乙醇浸出液，所选蜂胶经乙醇浸提，制备蜂胶乙醇浸出液干物质含量≥50％。