[发明专利]测定人POT1基因rs10250202位点多态性的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种测定人POT1基因rs10250202位点多态性的方法，包括：

提供待测人基因组DNA；

提供扩增人POT1基因rs10250202位点附近序列的上游引物和下游引物，其中上游引物具有错配碱基T；

以所述待测人基因组DNA为模板，利用上游引物和下游引物进行PCR扩增反应以获得含TGATMA片段的扩增产物，其中M为人POT1基因rs10250202位点上的待定碱基A或C；

提供限制性内切酶；

利用限制性内切酶对所得扩增产物进行酶切以获得相应的酶切产物；以及

根据所得酶切产物来确定人POT1基因rs10250202位点上的待定碱基M是A还是C，

其中，限制性内切酶为仅能够切开TGATCA片段与TGATAA片段之一的限制性内切酶。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在所得扩增产物上，上游引物的错配碱基T与M之间相隔三个碱基GAT。

3.根据权利要求2所述的方法，其中在所得扩增产物上，上游引物末端碱基与M相邻。

4.根据权利要求2所述的方法，其中在所得扩增产物上，上游引物末端碱基不与M相邻。

5.根据权利要求1所述的方法，其中限制性内切酶为仅能切开TGATCA片段的BclI或其同裂酶。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所得酶切产物包括三种片段类型：具有总片段长度的未切断扩增产物、切断后具有较长片段的扩增产物以及切断后具有较短片段的扩增产物，通过判断酶切产物所包含的片段类型来确定人POT1基因rs10250202位点上的待定碱基M是A还是C。

7.根据权利要求6所述的方法，其中判断酶切产物所包含的片段类型是通过凝胶电泳联合紫外灯拍照后与参照图对比来进行的。

8.根据权利要求7所述的方法，其中参照图是扩增产物在凝胶电泳标准设定时间后经紫外灯拍照后而得且仅具有第一参照图像位置和第二参照图像位置，其中第一参照图像位置针对的是未切断的总片段长度的扩增产物，而第二参照图像位置则针对的是切断后具有较长片段的扩增产物。

9.根据权利要求1所述的方法，其中通过设计上游引物和下游引物的长度而使得扩增产物的总片段长度在100至300bp之间，并且上游引物的片段长度至少为35bp，使得酶切切掉部分片段占总片段的长度的百分比超过20％。

10.一种用于测定人POT1基因rs10250202位点多态性的试剂盒，其包含：

用于PCR扩增人POT1基因rs10250202位点附近序列的上游引物和下游引物，其中上游引物具有错配碱基T以获得含TGATMA片段的扩增产物，其中M为人POT1基因rs10250202位点上的待定碱基A或C；以及

仅能够切开TGATCA片段与TGATAA片段之一的限制性内切酶。