[发明专利]一种活化部分凝血活酶时间测定试剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种凝血试剂及其制备方法，特别涉及一种活化部分凝血活酶时间测定试剂及其制备方法。

背景技术

活化部分凝血活酶时间(APTT)可用于判断内源性凝血活性状态，是临床上主要的凝血性能测试指标之一。活化部分凝血活酶时间测定试剂的主要组份为活化剂和磷脂，磷脂是含有磷酸的脂类，属于复合脂。作为血小板替代物，磷脂参与内源性凝血途径。作为活化部分凝血活酶时间测定试剂的主要组份之一，磷脂富含不饱和脂肪酸，易被氧化从而产生一系列过氧化脂质，从而影响了其生理活性。以磷脂酰胆碱为例，其分子中含有甘油、脂肪酸、磷酸及胆碱等基团。同时，其分子中不同碳位上所接的脂肪酸不同：α碳位(R₁CO－)上接的几乎都是饱和脂肪酸，而β碳位(R₂CO－)上接的一般为油酸、亚油酸、亚麻酸及花生四烯酸等不饱和脂肪酸。在化学性质上，主要表现在脂键、脂肪酸和磷脂的X基(CH₂CH₂N(CH₃)₃)上，可发生包括氧化、羟基化等反应。特别地，其中的不饱和脂肪酸易于氧化发生自发的氧化反应，生成过氧化产物，从而影响了磷脂的性能。

为了避免APTT测定试剂中的磷脂氧化，同时也为了制备稳定性较好的APTT测定试剂，包括避免试剂中微生物和细菌的繁衍，丁基羟基甲苯、丁基羟基茴香醚和叠氮酸钠成为APTT测定试剂稳定剂的主要选择，这方面可查询到的专利文献很多，包括早期的专利文献US4455377和US5091304。在这些常用的稳定剂当中，丁基羟基甲苯具有一定的毒性，毒性相对较小，而叠氮酸钠的毒性较大，与铜管等接触易于引爆，因此，增添了生产过程中原料的使用和控制难度。另外，除了加入丁基羟基甲苯或丁基羟基茴香醚、叠氮酸钠以外，为了进一步提升活化部分凝血酶测定试剂的稳定性，在试剂中加入多糖或多醇类聚合物(JP2994557B2，JP3330685B2)，这类物质的加入，可提高APTT所含组成尤其是活化剂的分散性和均匀性，或作为一种助悬剂，提高溶液的粘度，使胶体颗粒能够长期悬浮在溶液中不会沉降，然而，这类高分子化合物的加入，在提升混合液粘度的同时，也会降低采用光学法测定的APTT值的准确度。

发明内容

本发明针对现有APTT测定试剂中稳定剂的不足，提出一种新型的APTT测定试剂，生产安全性更高、稳定性效果更强、检测准确度更高。

本发明采用的技术方案如下：

一种APTT测定试剂，组分包括：磷脂、活化剂及稳定剂，所述的稳定剂包括丙氨酸和儿茶酸，所述丙氨酸的加入量为质量体积比1-4％，所述儿茶酸的加入量为0.5-5mM。

进一步地，上述APTT测定试剂中还包括其它稳定剂，包括：氯化钠、丁基羟基甲苯、抗坏血酸、聚乙二醇、甘露醇、麦芽糖中的一种或几种。

进一步地，上述APTT测定试剂中各组分的含量为：磷脂0.002-0.05％、活化剂0.002-0.08％、丙氨酸1-4％、儿茶酸0.5-5mM，其中的百分比均为质量体积百分比。

优选地，上述APTT测定试剂中各组分的含量为：磷脂0.04％，活化剂0.05％，丙氨酸2.5％，儿茶酸1.5mM，其中的百分比均为质量体积百分比。

上述其它稳定剂的加入量为：氯化钠0.5-3％、丁基羟基甲苯0.01-0.1％、抗坏血酸0.05-0.5％、聚乙二醇0.01-0.5％、甘露醇1-4％、麦芽糖1-3％，其中的百分比均为质量体积百分比。

优选地，上述其它稳定剂的加入量为：氯化钠1.5％，丁基羟基甲苯0.04％、抗坏血酸0.2％、聚乙二醇0.05％、甘露醇2％、麦芽糖的加入量为1.5％，其中的百分比均为质量体积百分比。

所述活化剂为纳米二氧化硅。

所述磷脂是磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰胆碱和磷脂酰甘油中的至少两种，并至少包含磷脂酰丝氨酸和磷脂酰甘油。

上述APTT测定试剂中还可加入羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液，加入量为25-75mM。

上述APTT测定试剂中还可加入调节APTT值的二价金属离子的氯化物，包括氯化镁、氯化钙等。

上述APTT测定试剂的制备过程包括：制备羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液，调节缓冲液pH值至中性，并加入氯化钠；向上述缓冲液中加入活化剂，经搅拌混匀后，加入磷脂及其它组分，经混匀搅拌并过滤后，即得到APTT测定试剂。氯化钠早于其它组分加入，一方面起到溶液离子强度调节剂的作用，另一方面起到稳定剂的作用。