[发明专利]一种meso-2,3-丁二醇脱氢酶编码基因、重组酶及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种来源于地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)CICIMB0109的meso-2,3-丁二醇脱氢酶基因，其特征在于所述基因的核苷酸序列为SEQIDNO.1所示，或者对SEQIDNO.1所示核苷酸序列的一个或多个核苷酸进行替换、缺失或增加得到的编码具有meso-2,3-丁二醇脱氢酶活性蛋白质的核苷酸序列。

2.一种权利要求1所述基因编码的meso-2,3-丁二醇脱氢酶，其特征在于，所述蛋白质氨基酸序列为SEQIDNO.2所示，或者由SEQIDNO.2所示氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或多个氨基酸而得到的具有meso-2,3-丁二醇脱氢酶活性的衍生蛋白质。

3.一种重组表达载体，携带权利要求1所述的meso-2,3-丁二醇脱氢酶编码基因的质粒。

4.一种重组表达基因工程菌，其包含如权利要求3所述的重组表达载体。

5.一种权利要求2所述重组meso-2,3-丁二醇脱氢酶的制备方法，具体步骤如下：培养如权利要求7所述的重组表达基因工程菌，获得重组表达的meso-2,3-丁二醇脱氢酶或含meso-2,3-丁二醇脱氢酶的重组生物细胞。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于其包括如下步骤：将如权利要求4所述的重组表达基因工程菌接种至含卡那霉素的LB培养基中培养，当培养液的光密度OD₆₀₀达到0.5-0.7，优选0.6时，在终浓度为0.2mmol/L的异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷的诱导下，即可得重组脱氢酶；所述的LB培养基包括蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L和NaCl10g/L，pH为7.0。

7.如权利要求2所述的meso-2,3-丁二醇脱氢酶作为催化剂在不对称还原前手性双羰基化合物以制备光学纯手性二醇中的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于：所述的应用按下述方法进行：在pH6-8的磷酸盐缓冲液中，在葡萄糖脱氢酶、葡萄糖和NAD⁺的存在下，在如权利要求2所述的脱氢酶的作用下，将前手性双乙酰进行不对称还原反应，制得光学活性(2S,3S)-丁二醇。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于：所述的双乙酰在反应液中的浓度为10-500mmol/L；所述的重组脱氢酶的用量为1-10kU/L；葡萄糖脱氢酶的用量为1-10kU/L；所述的葡萄糖的用量为20-1000mmol/L；所述的NAD⁺的用量为0.1-1.0mmol/L；所述的磷酸盐缓冲液的浓度为0.1mol/L，pH6-8；所述的不对称还原反应的温度为25-35℃；所述的不对称还原反应的时间以反应完全为准。