[发明专利]诱导布朗葡萄藻B12藻株高效积累亚麻酸的方法

说明书

本发明提供一种诱导布朗葡萄藻B12藻株积累高效亚麻酸的方法，其特征在于采用如下步骤：1)制备藻液：在23℃±2℃、光强1900±100lx和光暗比为12h/12h的条件下，采用1/4倍BG11培养基培养布朗葡萄藻B12藻株细胞28天到对数生长期，获得用于植物生长调节剂诱导的藻液，培养期间每14天加一次1倍浓度的BG11营养盐；2)积累亚麻酸：取对数生长期藻液200mL置于300mL三角锥形瓶中，然后加入植物生长调节剂ETH，植物生长调节剂ETH在藻液中的浓度为0.01±0.001mg/L，于23℃±2℃进行诱导处理14±1天，处理阶段每天人工摇藻不少于3次，相邻摇藻时间间隔不小于2小时，实现亚麻酸在藻液中的积累。本发明简单易行、成本低廉，能在短期内显著提高布朗葡萄藻B12藻株细胞亚麻酸含量积累。

技术领域

本发明提供一种通过诱导布朗葡萄藻B12藻株高效积累亚麻酸的方法，属于生物技术领域。

背景技术

布朗葡萄藻(Botryococcus braunii)隶属于绿藻门(Chlorophyta)、绿藻纲(Chlorophyceae)、绿球藻目(Chlorococcales)、布朗葡萄藻科(Botryococcaceae)、布朗葡萄藻属(Botryococcus)，是一种世界性分布的淡水单细胞微藻。布朗布朗葡萄藻含有较高的胞外多糖、脂肪酸，尤其是含烃量。在培养物中,其产烃量为生物量干重的0.3％～76.0％,通常为25％～40％,在天然样品中最高达86％，大大高于其他微生物的含烃量(几乎都低于1％),其产烃平均热值较高，1kg葡萄烃完全燃烧能放出3.0×10⁴～4.2×10⁴kJ热量，燃烧后对大气CO₂含量无净增加并且布朗葡萄藻所产烃的组成和结构与石油极其相似,在一些石油沉积中几乎全部有机质都是该藻形成的,故又被称为“油藻”，最可望成为工业藻种。因此，布朗葡萄藻生产石油替代品日益受到重视，从20世纪六七十年代开始,受到各国科学家们的广泛关注，美、法、日、英、澳、苏、荷和南朝鲜等国都或早或晚开展了有关研究，极具成为新生物能源的潜在价值。

共轭亚麻酸(conjugaed linolenic acid简称CLN)指一类具有三个共轭双键的十八碳三烯酸，自然界中主要以植物种子油的形式存在于桐树、石榴籽、苦瓜籽等中。CLN由于双键位置的不同存在不同的位置异构体，如9，11，13一CLN和8，10，12一CLN等，每组异构体又因双键的几何构型存在不同的几何异构体，如c，c，c—CLN和c，c，t—CLN等。天然存在的主要是三种8，10，12一CLN异构体和四种9，11，13一CLN异构体。CLN在发现初期并没有引起人们的重视，近年来随着其多种有益生理功能被证实，逐渐成为国内外学者研究的热点，被誉为“21世纪的新型营养因子”，CLN具有非常有益的生理活性，包括抗癌、降血脂、提高免疫力、减肥、降血糖、提高免疫力等。微藻是进行生长调节剂诱导的优良材料，其结构简单、生命周期短、光敏性强、代谢过程极易受环境影响，也容易被检测。