[发明专利]人类Y染色体27个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用

权利要求书

1.人类Y 染色体27 个STR 基因座的荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于，包含27个STR 基因座的特异性扩增引物对，所述27 个STR 基因座为：DYS392、DYS389I、DYS447、DYS389II、DYS438、DYS527a、DYS527b、DYS522、DYS391、DYS456、DYS19、DYS388、DYS448、DYS385a、DYS385b、DYS481、DYS437、DYS390、DYS460、DYS533、DYS458、DYS393、Y_GATA_H4、DYS439、DYS635、DYS444、DYS643；27个基因座的特异性扩增引物的序列如SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:48所示；

所述特异性扩增引物浓度分别为：SEQ ID NO:1~2 0.06μM、SEQ ID NO: 3~4 0.05μM、SEQ ID NO: 5~6 0.12μM、SEQ ID NO: 7~8 0.06μM、SEQ ID NO: 9~10 0.08μM、SEQ ID NO:11~12 0.16μM、SEQ ID NO: 13~14 0.05μM、SEQ ID NO:15~16 0.05μM、SEQ ID NO:17~180.12μM、SEQ ID NO:19~20 0.11μM、SEQ ID NO:21~22 0.06μM、SEQ ID NO:23~24 0.09μM、SEQ ID NO:25~26 0.11μM、SEQ ID NO:27~28 0.05μM、SEQ ID NO:29~30 0.08μM、SEQ IDNO:31~32 0.07μM、SEQ ID NO:33~34 0.15μM、SEQ ID NO:35~36 0.16μM、SEQ ID NO:37~380.11μM、SEQ ID NO:39~40 0.13μM、SEQ ID NO:41~42 0.11μM、SEQ ID NO:43~44 0.14μM、SEQ ID NO:45~46 0.15μM、SEQ ID NO:47~48 0.16μM；

所述特异性扩增引物分组进行荧光染料标记的分组方式为：DYS392、DYS389I、DYS447、DYS389II、DYS438、DYS527a、DYS527b、DYS522为第一组；DYS391、DYS456、DYS19、DYS388、DYS448、DYS385a、DYS385b为第二组；DYS481、DYS437、DYS390、DYS460、DYS533、DYS458，为第三组；DYS393、Y_GATA_H4、DYS439、DYS635、DYS444、DYS643，为第四组；

所述标记的荧光染料为6-FAM、HEX、TAMRA、ROX中任意一种，且每组之间都不相同。

2.根据权利要求1 所述的荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于：所述特异性扩增引物分组进行荧光染料标记，每对引物中至少有一条引物的5’端用荧光染料标记。

3.根据权利要求2 所述的荧光标记复合扩增试剂盒，其特征在于：还包括反应混合液、热启动Taq酶和超纯水，所述反应混合液组成为：MgCl₂ 7.5mM, Tris-HCl 125mM，KCl125mM，dNTPs 7.5mM，BSA 2g/L。

4.权利要求1~3中任意一项所述的荧光标记复合扩增试剂盒在法医鉴定、亲子鉴定或DNA家谱构建中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：将试剂盒内试剂与样品DNA 装入PCR 扩增管，置于热循环仪上，进行PCR 扩增，扩增程序为：95℃ 2min；94℃ 30s、59℃ 1min、72℃1min，共29个循环；60℃终延伸30min；4℃保温得到扩增产物，将扩增产物在遗传分析仪上进行荧光检测，再用片段分析软件GeneMapper分析基因测序仪上检测到的数据。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述样品DNA包括利用Chelex法、磁珠提取法或有机法抽提法中任意一种提取的人基因组DNA，或者免提取的滤纸、FTA卡、棉签、纱布中任意一种载体收集的人类血液或口腔细胞。