[发明专利]一种动物用肽疫苗及其制备

权利要求书

1.一种用于口蹄疫合成肽疫苗的多肽，其中所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.6所示，所述氨基酸序列中的两个半胱氨酸的巯基经氧化连接在一起形成二硫键，并且所述氨基酸序列的首尾氨基酸残基的羧基与氨基之间反应形成共价连接。

2.一种口蹄疫合成肽疫苗，其中包含权利要求1所述的多肽。

3.根据权利要求2所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗包含佐剂。

4.权利要求1所述的多肽的制备方法，其中包括以下步骤：

(1)以氨基树脂为起始原料，以9-芴甲氧羰基保护的氨基酸为单体，按照所述氨基酸序列依次缩合接上氨基酸，每步缩合反应后用乙酰咪唑封闭未反应的氨基端；

(2)合成完毕后加入裂解试剂裂解多肽；

(3)使用乙醚收集、沉淀多肽；

(4)超滤纯化多肽后进行无菌处理。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述裂解试剂的组分体积比为三氟乙酸：三异丙基硅烷：苯酚：H₂O＝85：8：6：1。

6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其特征在于，所述裂解时间为1-4小时。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)包括以下步骤：

(a)脱保护反应：将氨基树脂置于体积百分比为15-30％的六氢吡啶的N-甲基吡咯烷酮(NMP)溶液中，在20-28℃条件下反应25-40分钟脱除氨基树脂上的9-芴甲氧羰基保护基团；

(b)洗涤：氮气吹干，N-甲基吡咯烷酮洗涤氨基树脂；

(c)缩合反应：加入1-羟基苯并三唑(HOBT)、二环己基碳二亚胺(DCC)与9-芴甲氧羰基保护的氨基酸在20-28℃条件下反应0.5-2.5小时；

(d)洗涤：氮气吹干，N-甲基吡咯烷酮洗涤氨基树脂；

(e)封闭反应：加入重量体积百分比为1.5-4％的乙酰咪唑的N-甲基吡咯烷酮(NMP)溶液，在20-28℃条件下反应20-40分钟。

8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)包括以下步骤：

(a)使用切向过滤膜包在20-28℃条件下超滤多肽抗原，除去小分子杂质；

(b)使用0.2微米在线滤器除菌保存。

9.权利要求2或3所述的疫苗的制备方法，其中包括以下步骤：

(1)用注射用水将权利要求1所述的多肽稀释到50μg/ml制得抗原水相；

(2)将佐剂经121℃、30分钟灭菌备用；

(3)在20-28℃条件下，按照抗原水相与佐剂1：1的体积比，先将佐剂加入乳化罐内，90-150转/分钟慢速搅拌1.5-3分钟，缓慢加入水相，加完后搅拌20-30分钟，再高速8000-10000转/分钟搅拌15-30分钟，静置5分钟，分装后即得。

10.权利要求1所述的多肽或者权利要求2或3所述的疫苗在制备预防口蹄疫的药物中的用途。