[发明专利]重组单纯疱疹病毒及它感染和制备它的宿主细胞以及它们的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种重组病毒、制备该重组病毒的宿主细胞，感染有该病毒的宿主细胞，以及所述重组病毒、制备该重组病毒的宿主细胞以及感染有该病毒的宿主细胞的应用。具体地说，本发明涉及一种重组单纯疱疹病毒、制备该重组单纯疱疹病毒的宿主细胞，感染有该重组单纯疱疹病毒的宿主细胞，以及所述重组单纯疱疹病毒、制备该重组单纯疱疹病毒的宿主细胞和感染有该重组单纯疱疹病毒的宿主细胞的应用。

背景技术

一、血友病概述

血友病(hemophilia)是一组性联隐性遗传的出血病。其临床上分为血友病A(凝血因子Ⅷ缺陷症)和血友病B(凝血因子Ⅸ缺陷症)两型，分别由凝血因子Ⅷ(FⅧ)和凝血因子Ⅸ(FⅨ)基因突变所致。在男性人群中，血友病A的发病率约为1/5000，血友病B的发病率约为1/25000；所有血友病男性患者中，血友病A约占80％～85％，血友病B约占15％～20％。女性血友病患者极其罕见。

临床上，血友病以关节、肌肉、内脏和深部组织自发性或轻微外伤后出血难止为特征。出血部位常见于负重的大关节(如膝、肘、踝、腕、髂、肩等)和肌肉软组织(腰方肌、上肢肌、下肢肌等)、内脏(如腹腔内、腹膜后、泌尿、消化、呼吸道等)、皮肤粘膜(如皮肤淤血、鼻出血、口腔出血、牙龈出血等)。致命性的出血有颅内出血、神经系统出血、咽喉部出血和无准备的创伤、手术出血等。

根据血友病人出血的严重程度和血浆中的FVIII活性/FIX活性的水平，血友病A分为重型(＜1％)、中型(1-5％)和轻型(5-40％)，出血的表现型与FVIII的缺陷程度有关。轻型的仅会在创伤或外科手术中血流不止，但是重型的会在创伤后频繁的或是自发的过度流血，尤其是关节或肌肉创伤。

目前，发达国家血友病患者基本能像正常人一样生活，而在我国，血友病患者仍处于致残率高、生活质量低、预期寿命短的状况中。

二、血友病的治疗

血友病的现代化治疗始于二十世纪七十年代，是随着血浆来源的FVIII浓缩液的工业技术发展而发展起来的。这类产品的普及使得患者可在家中进行治疗，这彻底改善了血友病的治疗，使得患者的生活质量和寿命有了显著的提升，然而，在十年后的二十世纪八十年代，大量的病人却死于血源性感染的HIV，且肝炎病毒可在血浆中传输，这使得寻找一个安全的血友病的治疗显得尤为重要。后来，纯化(冷沉淀、离子交换、凝胶渗透或单克隆抗体的免疫亲和色谱法)的实现和病毒灭活(溶剂洗涤、热治疗/巴氏消毒)或去除(超滤)技术提高了血源性八因子浓缩产品的安全性，在过去的25年间，肝炎或HIV病毒的血源性转移已不在发生。轻型的血友病患者可用DDAVP(1-去氨基-8-右旋-精氨酸加压素)输入治疗。DNA技术的快速发展，尤其是1984年FVIII基因的克隆，使得重组FVIII成为可能。在1989年发表了第一份两例使用重组FVIII产品的重症血友病患者的临床疗效。

A型血友病替代疗法最具挑战性的并发症是凝血因子抗体的抑制剂的出现，近25-30％的患者在治疗的前50天内受影响，抑制剂会使替代疗法失效，使病人无法达到安全有效的治疗水平，而且有提高发病率和死亡率的危险。而抑制剂的形成原因多种多样，如种族、MHC基因型、免疫应答基因的多态性等内因，及FVIII注射天数、首次注射FVIII年龄、FVIII浓缩产品的治疗方式等外因。必须使用绕道治疗(bypasstherapy)，也就是利用APCC(凝血素复合体浓缩液)或基因重组制造的活化第七因子(RecombinantActivatedFactorVII)，直接活化下游的凝血因子，促进凝血过程的开展。平时，为了减少抗体产生，应该避免使用产生抗体的凝血因子。不过，部分病人利用类似“减敏治疗”的作法，在长时间接触少量会发生抗体的凝血因子之后，不再产生任何抗体。当病人体内的抗体消失后，又可以利用补充凝血因子来治疗疾患，而不需要绕道治疗。

为了降低预防治疗注射的频率，现在实际上更专注于发展长效因子的产品，而实现这一目的的方法就是基因治疗，目前，已经通过融合载体蛋白(如IgG的Fc区)用基因工程的方法获得，根据I-II期的研究观察到FVIII产物半衰期延长，这可能使静脉注射量减少至50-100每年(标准是150-180)，目前人们对基因治疗的研究进展良好，以腺病毒为载体的基因治疗的潜在适用性在研究中，而在B型血友病中已有一例成功的报道。