[发明专利]用血凝仪测定肝素或低分子量肝素效价的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种肝素（盐）或者低分子量肝素（盐）效价的检测方法，尤其涉及一种用血凝仪测定肝素（盐）或者低分子量肝素（盐）抗Xa效价的检测方法。

背景技术

肝素（盐）或者低分子量肝素（盐）是一种抗凝血和抗血栓形成的药物。肝素（盐）或者低分子量肝素（盐）可分离抗血栓活性，即抗Xa效价。人体血浆中Xa活性与血栓形成关系较密切，也就是说，因子Xa活性偏高，会出现临床上形成血栓状况，故在临床上常常使用肝素（盐）或者低分子量肝素（盐）的抗Xa效价活性。

现在中国药典、欧洲药典均采用发色底物法检测肝素（盐）或者低分子量肝素（盐）的抗Xa效价，这种方法需要测定16管样本，其中8个为标准品的反应数据，8个为试样的反应数据，这些反应均为体外模拟抗栓的酶反应。由于体外模拟的酶反应的影响因素较多，人为控制反应的准确性很难，往往得不到准确的数据，经常出现数据波动性大的问题；且这种方法为半微量酶反应，反应所用试剂很贵，实验成本很高。

所以，开发一种精确、简便的抗Xa的测定方法，来指导肝素（盐）或者低分子量肝素（盐）低分子量肝素生产厂家的质量控制，也可以为医院临床提供精准的剂量控制是非常有益的和十分必要的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：发色底物法繁琐、误差大、成本高。针对现有技术存在的不足，提供一种用血凝仪测定肝素（盐）或者低分子量肝素（盐）抗Xa效价的检测方法。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

一种用血凝仪测定肝素（盐）或者低分子量肝素（盐）抗Xa效价的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）标准系列溶液的配置

准确配制标准品溶液、ATⅢ溶液、Xa因子溶液、发色底物S-2765溶液；

（2）绘制标准曲线

利用血凝仪自动配制标准品溶液进行稀释，得到4个梯度浓度的标准品溶液，依次加入ATⅢ溶液、Xa因子溶液、发色底物S-2765溶液，在血凝仪内进行反应，反应结束后，自动在测定吸光度；然后以标准品溶液稀释浓度的对数值为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求得线性方程，Y=kX+b，计算相关系数R²；

（3）样品的处理及检测

配制一定浓度的供试品溶液，溶液浓度预估在标准品稀释浓度范围之内，然后依次加入ATⅢ溶液、Xa因子溶液、发色底物S-2765溶液，在血凝仪内进行反应，反应结束后，自动测定吸光度；

（4）计算（计算方法，公式）

根据供试品溶液的吸光度在标准曲线上求出浓度对数，根据浓度对数计算出其稀释后的浓度，根据稀释倍数计算出其原始浓度，即浓度以效价计。

如上述的一种用血凝仪测定肝素（盐）或者低分子量肝素（盐）抗Xa效价的检测方法，其特征在于：步骤（2）中所述的标准曲线，线性相关系数R²值大于或等于0.95。

如上述的一种用血凝仪测定肝素（盐）或者低分子量肝素（盐）抗Xa效价的检测方法，其特征在于：步骤（2）和步骤（3）中所述的测定吸光度时光波长为405nm。

如上述的一种用血凝仪测定肝素（盐）或者低分子量肝素（盐）抗Xa效价的检测方法，其特征在于：步骤（2）中所述的血凝仪内反应在37度温育区。

由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：

本说明书所阐述的抗Xa的测定方法，利用血凝仪代替人工进行测定，从而减少了人为操作误差特别是人为多次稀释试剂造成的实验误差，提高了实验准确性；还使实验由半微量法反应变成了微量反应，从而节省了大量昂贵的试剂，降低了实验成本；数据计算方法由4×4生物统计法变为直线方程法，处理数据更加直观方便，并且所需实验数据更少即可得到准确结果。相比原方法具有成本低、速度快、准确度高的优点。

附图说明

图1是标准品在405nm光波下的吸光度和标准品浓度对数的标准曲线图（稀释比例0.8）；

图2是浓度为0.2IU/ml样品在405nm光波下的吸光度和浓度为0.2IU/ml样品浓度对数的标准曲线图（稀释比例0.8）；

图3是浓度为0.15IU/ml样品在405nm光波下的吸光度和浓度为0.15IU/ml样品浓度对数的标准曲线图（稀释比例0.5）。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

所用试剂批号及仪器型号如下：