[发明专利]抑制根结线虫二龄幼虫和卵的堆肥提取液的制备及防治方法

说明书

技术领域

本发明属于根结线虫防治领域，具体涉及一种利用农业废弃物堆肥获得的提取液防治蔬菜根结线虫及其防治方法。

背景技术

蔬菜根结线虫病害是生产上重要的土传病害，该病害寄主范围广泛，尤其以茄科、葫芦科等植物发病较普遍。近年来随着产业结构的调整，蔬菜保护地的种植面积不断扩大。由于设施内土壤条件、栽培和管理措施等的特殊性，使得根结线虫发病程度远重于大田。据估计，中国因线虫病害对蔬菜危害的损失已达到30亿以上。

目前防治根结线虫病害的方法有农业防治、物理防治、化学防治、选育抗性品种和生物防治，但都存在一定的弊端。由于人们普遍追求产量和利润，因此农业防治如水旱轮作的方法很难实施。物理防治如种子消毒和土壤消毒虽有一定效果但不够彻底，且有些物理消毒成本太高，不易推广。化学防治是目前生产上应用较多的方法，但长期使用会造成根结线虫抗药性增强，且杀线剂多高毒高残留，对人类的生命安全有潜在的威胁。抗线虫基因多来自野生或半野生种属而且常与不良的农艺性状连锁，选育工作比较困难。且一个地区连续种植一个抗病品种之后，抗性会逐渐消失。目前生物防治研究较多的是生防菌，并且筛选到很多防治根结线虫效果好的菌株，但生防菌的效果不稳定，不易在土壤中定植，这给生防菌的推广使用带来挑战。

根结线虫的生活史：卵在卵囊中孵化成一龄幼虫，然后进行一次蜕变成二龄幼虫。二龄幼虫侵入寄主根系，逐渐发育为三龄幼虫、四龄幼虫，最终发育为成虫。因此能否抑制卵孵化成幼虫和毒杀二龄幼虫以防止其侵入寄主根系成为评估某些防治方法是否有效的指标。

农作物秸秆自然界中数量巨大且具有多种用途的可再生有机质资源。它是农作物的主要副产品。玉米在我国种植面积广，产生大量的玉米秸秆，但秸秆利用价值不高，大量作物秸秆废弃物产生后往往被集中焚烧，造成严重的空气污染，同时又带来安全隐患。虽然生产上推广秸秆还田，但纤维素不能有效分解并融入土壤中，秸秆难以吸收利用。而简单埋入土里的大量秸秆，如果短时间内无法被利用，反而滋生大量病虫，对农业生产造成严重危害。

发明内容

基于此，随着生活质量的提高，人们越来越青睐绿色无污染的蔬菜。因此，寻找一种高效环保、操作简便、成本低廉的防治根结线虫的新方法，是很有必要的。

本发明公开一种农业废弃物提取液的制备方法，以及获得的提取液对根结线虫二龄幼虫的毒杀作用效果和抑制卵的孵化效果。提高秸秆的利用效率，改善农村环境，并提供一种防治根结线虫的新材料和新方法。具体方法如下：

步骤A:堆肥化处理:田间收集废弃的玉米秸秆并将其粉碎，置于空塑料桶中，一边加入粉碎的玉米秸秆，一边加水搅拌均匀，使玉米秸秆充分湿润，再将桶内的玉米秸秆压紧，并充满整个塑料桶；

步骤B:加双层盖密封，常温下进行厌氧发酵，期间未进行氧分和水分的补充；

步骤C:提取液的制备，包括以下几个步骤：

步骤a：取腐熟的玉米秸秆堆肥于塑料桶中，之后加入水，充分搅拌均匀，使堆肥完全浸没于水中，然后加双层盖密封，室温下进行提取；

步骤b：提取后将密封盖打开，再次搅拌均匀后，通过纱布过滤即得到玉米秸秆堆肥的提取液，将获得提取液置于冰箱中保存备用，并以此作为原液进行试验。

优选的，所述步骤a中，提取的时间为7天。

优选的，所述步骤b中，所述纱布采用四层。

优选的，所述步骤b中，保存备用的温度为4℃。

本发明的一个目的是提供一种新的用于防治植物根结线虫病的方法，用于解决目前防治蔬菜根结线虫病的化学杀线剂所带来的环境污染、食品不安全等一系列问题。本发明的另一目的是解决生产后大量农业废弃物秸秆的处理问题。

本发明还提供一种采用玉米秸秆堆肥提取液为原液进行对二龄幼虫毒杀效果的测定方法，包括以下几个步骤：

步骤A:取所制备的玉米秸秆提取液原液加入青霉素瓶中，然后加入无菌水，最后加入根结线虫二龄幼虫的悬浮液，使每个小瓶含120-180条的二龄幼虫和3ml的液体，即得到2倍稀释液；

步骤B:每个处理设四个重复，以无菌水作对照；将不同处理放置于25±0.2℃恒温培养箱中，并于24h、48h和72h后分别取不同处理的线虫悬浮液镜检，统计死亡数，计算死亡率和校正死亡率；公式为：死亡率(％)＝死亡线虫数/处理线虫数×100，校正死亡率(％)＝(处理死亡率-对照死亡率)/(1﹣对照死亡率)×100。

本发明还提供一种采用玉米秸秆堆肥提取液为原液进行对根结线虫卵的孵化的测定方法，包括以下几个步骤：