[发明专利]豌豆抗白粉病等位基因er1-7的Indel标记及其应用

权利要求书

1.与豌豆抗白粉病基因er1-7共分离的Indel标记，其特征在于，用于扩增所述Indel标记的引物具有如下核苷酸序列：

InDel111-120-F：GGAGTTAAGGAACGAACTTTGG；

InDel111-120-R：CCATGTCTGCGTCTGTATCTTT；

所述引物扩增的与豌豆抗白粉病基因er1-7共分离的Indel标记特征条带为183bp，核苷酸序列如SeqIDNo.3所示。

2.用于筛选包含豌豆抗白粉病基因er1-7的豌豆种质资源的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的Indel标记引物；

所述Indel标记引物的核苷酸序列如下：

InDel111-120-F：GGAGTTAAGGAACGAACTTTGG；

InDel111-120-R：CCATGTCTGCGTCTGTATCTTT；

所述引物扩增的与豌豆抗白粉病基因er1-7共分离的Indel标记特征条带为183bp，核苷酸序列如SeqIDNo.3所示。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括进行PCR反应和/或电泳所需的试剂；

所述PCR反应所需的试剂包括：dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反应缓冲液、标准阳性模板、双蒸水和/或PCRMasterMix；

所述电泳所需的试剂包括：TE缓冲液、聚丙烯酰胺、琼脂糖、四甲基乙二胺、甲醛、硝酸银。

4.权利要求2或3任一所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，组装试剂盒的试剂中包括所述Indel标记引物；

所述Indel标记引物的核苷酸序列如下：

InDel111-120-F：GGAGTTAAGGAACGAACTTTGG；

InDel111-120-R：CCATGTCTGCGTCTGTATCTTT。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，组装试剂盒的试剂中还包括PCR反应和/或电泳所需的试剂；

所述PCR反应所需的试剂包括：dNTPs、TaqDNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反应缓冲液、标准阳性模板、双蒸水和/或PCRMasterMix；

所述电泳所需的试剂包括：TE缓冲液、聚丙烯酰胺、琼脂糖、四甲基乙二胺、甲醛、硝酸银。

6.权利要求1所述Indel标记或权利要求2-3任一所述试剂盒在鉴定包含豌豆抗白粉病基因er1-7的豌豆种质资源方面的应用，包括如下步骤：

(1)采用所述Indel标记引物对待测豌豆材料的基因组DNA进行PCR扩增；所述Indel标记引物的核苷酸序列如下：

InDel111-120-F：GGAGTTAAGGAACGAACTTTGG；

InDel111-120-R：CCATGTCTGCGTCTGTATCTTT；

(2)对扩增结果进行电泳检测；

(3)从电泳结果中筛选出与豌豆抗白粉病基因er1-7共分离的Indel标记特征条带一致的材料；

所述与豌豆抗白粉病基因er1-7共分离的Indel标记特征条带为183bp，核苷酸序列如SeqIDNo.3所示。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系为：豌豆基因组DNA2ng/μl,2×PCRMasterMix0.4μl/μl，上下游引物各0.2μmol/L，其余为双蒸水。

8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增的反应条件为：95℃预变性5分钟；以94℃30秒，45℃-63℃30秒，72℃30秒为1个循环，35个循环；72℃10分钟。

9.根据权利要求6-8任一所述的应用，其特征在于，所述电泳检测指，采用6％的聚丙烯酰胺凝胶或者3.5％的琼脂糖凝胶，于120V恒功率电泳分离，最后银染显色。