[发明专利]一种利用酶法除杂制备柞蚕蛹皮壳聚糖的工艺

权利要求书

1.一种利用酶法除杂制备柞蚕蛹皮壳聚糖的工艺，其特征是，它包括：利用10-15%的柠檬酸作为脱无机盐试剂，再利用碱性蛋白酶水解柞蚕蛹皮中的蛋白质，将脱盐脱蛋白后的产物，用1%H₂O₂处理脱色，用浓碱热化学法脱去甲壳质的乙酰基，经提纯处理后，最终获得符合标准的壳聚糖，具体工艺步骤如下：

1）柞蚕蛹皮的预处理

柞蚕蛹皮的分离，将除去蛹蛋白的柞蚕蛹皮反复水洗，至蛹皮内仅含有白色膜状物为止，吸干水分，上烘箱60℃条件下，干燥4h至恒重，将烘干后的柞蚕蛹皮粉碎，过60目筛待用；

2）除无机盐

取预处理后的柞蚕蛹皮粉，按固液比1：10的比例加入10-15%柠檬酸，在80℃条件下，恒温脱盐2-3h后水洗至中性，上述过程重复2-3次；

3）水解蛋白

取除去无机盐后的柞蚕蛹皮粉，选用碱性蛋白酶，按酶底比3000-4000u/g，在60-65℃条件下，pH值为8的环境中，水解6-8h除去蛋白，将产物过滤去渣、水洗至中性，上烘箱60℃条件下，干燥4h至恒重；

4）脱色

因柞蚕蛹皮中含有色素，要对甲壳质进行脱色处理，将脱盐脱蛋白后的原料按固液比1:10浸入1%H₂O₂溶液中，在80℃的条件下氧化脱色2h，然后将混合溶液滤去液体，将脱色后的产物水洗至中性，上烘箱60℃条件下，干燥4h至恒重，得淡黄色粉末状甲壳质待用；

5）甲壳质脱乙酰基制备壳聚糖

取脱色后的甲壳质，按料液比1:20加入浓度为55%的氢氧化钠溶液，恒温90℃，处理15h，脱去甲壳质的乙酰基获得粗壳聚糖；

6）粗壳聚糖的提纯

向产物的粗壳聚糖中加入10%醋酸溶液，使其溶解，静止24h，然后，用离心机，3000r/m，20m离心除去不纯物，将上清液用1N氢氧化钠溶液调整pH至10，根据等电点沉淀原理，壳聚糖将释出沉淀，再用离心机，3000r/m，20m离心收集沉淀，向收集到的沉淀物中加入去离子水，形成壳聚糖悬浮液，将悬浮液PH值调到7.0至中性，再用离心机，3000r/m，20m，离心收集沉淀物，将沉淀物用95%的乙醇溶液洗净，自然干燥后获得高纯度的浅黄色晶体状壳聚糖。