[发明专利]一种测定人血清中胃蛋白酶原I/II含量的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种采用乳胶增强免疫比浊法测定人血清中胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II含量的试剂盒。

背景技术

胃蛋白酶原(Pepsinogen，PG)是胃液中胃蛋白酶的无活性前体，是胃粘膜分泌的一种门冬氨酸蛋白酶前体，是分子量42000Da的单链多肽，在胃内转变为具有活性的胃蛋白酶。

根据生化性质、免疫原性、细胞来源及组织内分布，胃蛋白酶原可分成胃蛋白酶原Ⅰ（PGⅠ）、胃蛋白酶原Ⅱ（PGⅡ）两个亚群：其中1～5组分免疫原性近似，称为PGⅠ(PGA)，主要由胃底腺的主细胞和颈粘液细胞分泌；6～7组分被称为PGⅡ(PGC)，除由上述两种细胞分泌外，幽门腺的黏液细胞、贲门腺以及十二指肠上段的Brunner腺也能产生PGⅡ，胃粘膜合成的PGⅡ约为总量的25％。

目前检测血清胃蛋白酶原含量的方法主要有酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫分析(RIA)、化学发光法和胶乳免疫比浊法等。

ELISA方法精确、定量，具有很高的敏感性，但操作程序繁琐，耗时长，不能适应大规模体检筛查或急诊的需要；RIA方法灵敏度高，特异性强，但放射免疫反应是竞争性的反应，测得的值是相对量而非绝对量，且存在辐射和放射性污染；化学发光法精确度高，检测速度快，但成本高昂，对配套设施要求高，无法应用于广大中、基层的医院和医疗卫生机构；胶乳免疫比浊法具有操作简便快速、自动化、定量准确、敏感度高等优点，可满足门、急诊和大规模体检筛查等需要。

现有胶乳免疫比浊试剂，由于其检测原理是测定反应形成的免疫复合物的浊度，因此极易受到乳糜干扰的影响。目前应对这个问题的方法，主要是使用专门的乳糜消除剂对样本进行预处理。而在大规模的人群普查、健康体检筛查和临床病人检验时，经常会遇到大量的乳糜、溶血等浑浊样本，此时通过购置样本处理剂，对这些样本进行单独处理，将会极大地增加操作人员的工作量，提高运营成本，也为临床检验的组织安排带来难题。中国专利文献CN103698525A公开了一种试剂盒，利用脂肪酶或聚乙二醇-硫酸菊聚糖镁来消除乳糜干扰，这种方法提高了试剂盒的抗乳糜干扰能力，但是对于重型乳糜检测效果不够理想；其次，仅公开了适用胃蛋白酶原I的方法，没有提及胃蛋白酶原II。

因此，研制一种能够更好地消除乳糜干扰的胶乳免疫比浊法的胃蛋白酶原I/II检测试剂盒，显得十分必要。

发明内容

为了解决上述的技术问题，本发明实现了以下技术：

一种测定人血清中胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II含量的试剂盒，包含试剂R1，R2以及校准液；所述试剂R1为PH值为7.2-8.6的缓冲液，所述试剂R2为抗人PGI抗体胶乳试剂或抗人PGII抗体胶乳试剂；所述标准品为含有定量的PGI或PGII的重组蛋白或者是从人血清中提取出来的天然PGI或PGII;其特征在于，所述试剂盒还包括用于消除乳糜的试剂R3，所述试剂R3的由辛基甲氧基肉桂酸酯、聚氧丙烯聚氧乙烯丙二醇醚和聚乙二醇-硫酸菊聚糖镁组成。

所述试剂R3组分的重量份组成为：

辛基甲氧基肉桂酸酯20-50

聚氧丙烯聚氧乙烯丙二醇醚20-100

聚乙二醇-硫酸菊聚糖镁100-200。

所述的PGI／PGII检测试剂盒中的R1试剂主要包含缓冲液，无机盐，加速剂和防腐剂。

所述的PGI／PGII检测试剂盒中R2试剂主要包含稳定剂，抗人单(多)克隆抗体胶乳颗粒，缓冲液，稳定剂和防腐剂。其中乳胶微球直径为80-200nm。

试剂R1所述的无机盐选自氯化钠，氯化钾，硫酸钾一种或几种。缓冲液为：Tris缓冲液，MES缓冲液，磷酸盐缓冲液，碳酸盐缓冲液，甘氨酸-氢氧化钠缓冲液中一种或几种。加速剂为聚乙二醇4000，聚乙二醇6000，聚乙二醇8000中一种或几种。

试剂R2所选用的抗体为鼠抗人PGI／PGII单克隆抗体，羊抗人PGI／PGII单克隆抗体，兔抗人PGI／PGII单克隆抗体一种或者几种混合。也可以选鼠抗人PGI／PGII多克隆抗体，羊抗人PGI／PGII多克隆抗体，兔抗人PGI／PGII多克隆抗体其中一种。

试剂R2中的稳定剂选自小牛白蛋白，明胶，甘氨酸，吐温20，曲拉通中的一种或者几种。

本发明所述的试剂R2为抗人PGI／PGII抗体胶乳试剂，采用的是抗人的PGI／PGII抗体与胶乳颗粒相偶联。经过离心(过滤)的方法去掉未反应的偶联剂以及未反应的抗体，在含有稳定剂和防腐剂的缓冲液中分散而成。