[发明专利]一种检测VHL基因突变的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种检测VHL基因突变的方法，其特征在于，包括：

利用VHL基因的三个外显子VHL-1、VHL-2和VHL-3的扩增引物对4-6对待测样本进行VHL基因点突变、小片段缺失或插入、剪切位点突变的检测，获得所述DNA溶液中是否存在点突变、小片段缺失或插入、剪切位点突变的检测结果；

利用杂交探针对所述待测样本进行VHL基因大片段缺失的检测，获得待测样本是否存在大片段缺失的检测结果；

其中，所述杂交探针上标有荧光信号，由具有SEDIDNO.1-6所示的碱基序列的探针引物进行PCR制备得到的。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述扩增引物对4-6如SEQIDNO.7-12所示，包括：

扩增引物对4：VHL-1F5’-ggtggtctggatcgcgga-3’

VHL-1R5’-ggcttcagaccgtgctatcg-3’

扩增引物对5：VHL-2F5’-gtggctctttaacaacctttgc-3’

VHL-2R5’-cctgtacttaccacaacaaccttatc-3’

扩增引物对6：VHL-3F5’-gcaaagcctcttgttcgttc-3’

VHL-3R5’-caaaaatgccaccaccttct-3’。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，利用VHL基因的三个外显子VHL-1、VHL-2和VHL-3的扩增引物对4-6对待测样本进行VHL基因点突变、小片段缺失或插入、剪切位点突变的检测包括：

利用所述扩增引物对4-6和待测样本建立PCR扩增反应体系，进行PCR反应，获得PCR产物；

将得到的PCR产物进行纯化处理和测序分析，判断所述DNA是否发生了VHL基因点突变、小片段缺失或插入和剪切位点突变。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述利用杂交探针对所述待测样本进行VHL基因大片段缺失的检测包括：

利用已采集的待测样本制备细胞涂片；

将所述杂交探针置于杂交液中与所述细胞发生杂交反应，获得杂交产物；

洗涤所述杂交产物，并进行细胞核染色处理，获得核染色后的细胞涂片；

通过荧光显微镜观察所述核染色后的细胞涂片，判断待测样本是否发生了基因大片段缺失。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述制备细胞涂片的步骤包括：

分离所述样本中的细胞，经磷酸盐缓冲液洗涤和KCl低渗处理后，用固定液固定所述细胞的形态，制成细胞涂片；

将所述细胞涂片进行老化处理，经胃蛋白酶消化处理后，进行酒精梯度脱水，得到细胞涂片。

6.一种用于快速检测VHL基因突变的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的如SEDIDNO.1-6所示的碱基序列的探针引物制备得到的杂交探针。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，还包括：

用于进行PCR直接测序法对所述DNA溶液进行VHL基因点突变、小片段缺失或插入、剪切位点突变的检测，获得所述DNA溶液中是否存在点突变、小片段缺失或插入、剪切位点突变的试剂盒I；

用于进行荧光原位杂交法对所述DNA溶液进行VHL基因大片段缺失的检测，获得待测样本的DNA是否存在大片段缺失的试剂盒II。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒I包括：用于进行PCR反应的PCRmix和如SEQIDNO.7-12所示的扩增引物。

9.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒II包括：

用于将待测样本制备成细胞涂片的试剂；

用于使所述荧光原位杂交探针与所述细胞发生杂交反应，获得杂交产物的试剂；

用于洗涤所述杂交产物，进行细胞核染色处理，获得核染色的细胞涂片的试剂。